Полиморфизм гена BоLA-DRB3 в связи с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу крупного рогатого скота черно-пестрой и симментальской пород в условиях Республики Башкортостан

• Автор: Шарифуллина, Наиля Мусагитовна
• Шифр специальности: 06.02.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 120 с. : ил.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Определение и сущность лейкоза крупного рогатого скота

1.1.1 Определение лейкоза, этиология и пути передачи вируса лейкоза

1.1.2 Стадии течения лейкоза крупного рогатого скота

1.1.3 Патологоанатомические изменения при лейкозе крупного рогатого скота

1.1.4 Распространенность лейкоза крупного рогатого скота в Российской Федерации

1.1.5 Реакция иммунодиффузии и полимеразная цепная реакция в диагностике вируса лейкоза крупного рогатого скота
1.2 Генетическая обусловленность устойчивости и восприимчивости крупного рогатого скота к заболеванию лейкозом

1.3 Главный комплекс гистосовместимости крупного рогатого скота

1.4 Главный комплекс гистосовместимости и болезни

1.5 Методы изучения главного комплекса гистосовместнмостн

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материалы и методы исследования
2.2 Результаты собственных исследований
2.2.1 Распределение частот аллелей гена ВоЬА-ОІІВЗ в исследуемых популяциях крупного рогатого скота черно-пестрой породы
2.2.2. Распределение частот аллелей гена ВоЬА-ОЯВЗ в популяции крупного рогатого скота симментальской породы
2.2.3 Изучение ассоциаций аллелей гена ВоЬА-ОІІВЗ с риском развития лейкоза у крупного рогатого скота чернопестрой и симментальской пород
2.2.4 Распределение частот генотипов и ассоциаций с восприимчивостью к лейкозу в изученных популяциях крупного рогатого скота черно-пестрой и симментальской пород
2.2.5 Экономическая эффективность результатов исследований
3 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК ПРИЛОЖЕНИЕ
Актуальность темы. Многочисленные публикации и данные официальной ветеринарной статистики свидетельствуют о том, что среди инфекционных болезней крупного рогатого скота лейкоз по тяжести поражения органов, тканей, массовости проявления и экономическим последствиям занимает ведущее место. Заболевание наносит значительный экономический ущерб животноводству страны вследствие гибели и вынужденной выбраковки высокопродуктивных племенных животных, утилизации туш и органов с опухолевыми изменениями, расходов, связанных с ограничительными мероприятиями. Заболеваемость лейкозом крупного рогатого скота - одна из наиболее важных проблем не только ветеринарной медицины, животноводства, но и биологии, экологии в целом, имеющая непосредственное отношение к безопасности здоровья человека, так как BJ1KPC имеет близкое морфологическое и эволюционное родство с вирусом Т-клеточного лейкоза человека. Несомненно, одной из важнейших проблем онкологии и лейкозологии является возможная связь между заболеваемостью лейкозами и опухолями животных и человека. Большой интерес представляют проблемы потенциальной опасности для человека продуктов питания от животных из стад, неблагополучных по лейкозу, влияния вредных метаболитов, накапливающихся в организме больных коров, на организм человека, а также использования животных для получения биопрепаратов. Имеются данные об экспериментальном заражении обезьян бычьим лейкозом (Н.М.McClure, 1974). В связи с этим актуальным является проблема диагностики лейкоза на ранних стадиях заболевания. С помощью применяемых в настоящее время серологических методов диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота полностью искоренить заболевание невозможно. Поэтому особую значимость для точной диагностики вируса представляют методы молекулярной биологии, в частности, полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая зарекомендовала себя как надежный, специФГУП СПО «Стерлитамакский совхоз-техникум», черно-пестрого скота из Западной Украины - в ККХ «Заря». Клинически выраженных случаев в хозяйствах не отмечали.
Кровь для исследований брали по общепринятой методике. После фиксации животных прокалывали левую яремную вену и собирали венозную кровь в количестве 10 мл в пробирки с антикоагулянтом, в качестве которого применяли стерильный раствор «Глюгицир» в соотношении препарата и крови 1:4. Транспортировка и хранение стабилизированной крови осуществлялось при температуре -18...-20 С.
ДНК выделяли из лейкоцитов крови по стандартной методике с использованием протеиназы К, фенол-хлороформенной очистки с последующим осаждением этанолом (В.Н.Горбунова, 1999).
На первом этапе выделения ДНК 8 мл крови смешивали с 30 мл холодного лизирующего буфера (в его состав входят «Тритон Х-100», MgCb, сахароза и tris НС1 с рН=7,6), производили быстрый лизис клеток. Путем мягкого центрифугирования в течение 20 мин (4000 об/мин) осаждали ядра клеток на дно пробирки и сливали надосадочную жидкость. Добавляли 10 мл холодного лизирующего буфера, перемешивали с осадком и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 мин. Вновь осторожно сливали супернатант и ре-суспензировали ядерный осадок в 400 мкл буфера для протеиназы К (Soline EDTA). Затем переносили осадок с Soline EDTA в эппендорф на 1,5 мл, добавляли 30 мкл 10% SDS и 20 мкл протеиназы К. Для лучшего процесса про-теолиза эппендорф со смесью осажденных элементов крови и буфера с про-теиназой К помещали в термостат при 37°С на 12 часов.
Экстрагирование и удаление из раствора фрагментов белков, углеводов, липидов производили с помощью фенольной, фенол-хлороформной, а затем хлороформной очистки. Для этого добавляли 500 мкл забуференного фенола, перемешивали и центрифугировали при 6000 об/мин, в течение 10 минут. Супернатант переносили в другой эппендорф, добавляли 250 мкл забуференного фенола и 250 мкл смеси хлороформа и изоамилового спирта. Переме-