Влияние модифицированного клеточного ксенотрансплантата на индукцию защитных белков в поврежденном миокарде : экспериментальное исследование

• Автор: Бабушкина, Инна Викторовна
• Шифр специальности: 06.02.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Иркутск
• Количество страниц: 125 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. МЕХАНИЗМЫ ЗАЩИТЫ ПОВРЕЖДЕННОГО

СЕРДЦА (обзор литературы)

1.1. Защитные эффекты адаптации к стрессу. Ишемическое повреждение сердца. Феномен ишемического прекондиционирования .

1.2. Роль белков теплового шока в адаптации к стрессу

1.3. Клеточная трансплантация, роль белков теплового шока в защитном эффекте трансплантации

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Методика приготовления суспензий клеток сердца неонатального кролика

2.2. Общая характеристика эксперимента
2.3. Методы лабораторного контроля
2.4. Методы морфометрического исследования
2.5. Методы статистической обработки
ГЛАВА 3. ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ТЕПЛОВОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ
И АНТИБИОТИКА НА СОДЕРЖАНИЕ БЕЛКОВ ТЕПЛОВОГО ШОКА В СУСПЕНЗИИ КЛЕТОК СЕРДЦА НЕОНАТАЛЬНОГО КРОЛИКА
ГЛАВА 4. ВЛИЯНИЕ МОДИФИЦИРОВАННОГО КЛЕТОЧНОГО ТРАНСПЛАНТАТА НА МЕХАНИЗМЫ ЗАЩИТЫ МИОКАРДА ПРИ ПОВРЕЖДЕНИИ
4.1. Влияние трансплантации суспензий неонатальных клеток серд-
ца с низким и высоким уровнем БТШ на динамику развития патологического процесса в сердце
4.2. Трансплантация суспензий клеток сердца неонатального кроли-
ка при повреждении сердца в условиях заблокированных внутриклеточных механизмов защиты миокарда
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРЕДЛОЖЕНИЯ И РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АТФ - аденозинтрифосфат
АФК - активные формы кислорода
БТШ — белки теплового шока
ГРБ - глюкозорегулируемый белок из семейства БТШ
ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота
КК — креатинкиназа
ЛДГ — лактатдегидрогеназа
У.Е. — условные единицы
ФАСС — феномен адаптационной стабилизации структур
ВСІР - 5-bromo-4-chloro-3-indolilphosphate (5-бромо-4-хлоро
индолилфосфат)
NBT — nitroblue tétrazolium chloride (нитроголубой тетразолиум хлорид)

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Непрерывное нарастание в современном мире стрессовых воздействий на организм приводит к изменению функции сердца, состояние которой определяет здоровье и работоспособность как у человека, так и у животных [32, 59, 74, 87]. В связи, с чем поиск новых способов защиты миокарда от ишемического повреждения остается актуальным на протяжении многих десятилетий.
По данным литературы известно, что клеточная органоспецифическая трансплантация ограничивает повреждение органов при стрессе [6, 77, 84, 94, 102]. Обсуждаются разные теории механизмов действия клеточного трансплантата: трансдифференцировка, или слияние с клетками хозяина, мобилизация клеток-предшественниц, находящихся в самом миокарде, ангиогенез, стабилизация внеклеточного матрикса [5, 8, 24, 34, 35, 36, 43]. Кроме того, установлено, что одним из таких механизмов является стимуляция регенерации поврежденных тканей реципиента ростовыми факторами эмбриональных и неонатальных органоспецифических клеток, среди которых наиболее изученными являются фактор роста гепатоцитов и фактор роста эндотелия сосудов [1, 44, 111, 153, 155]. С другой стороны, известно, что трансплантация ксеногенных клеток сердца сопровождалась опережающим приростом внутриклеточных стресс-белков в поврежденном органе [1, 3].
Вместе с тем в ряде экспериментальных исследований показано, что увеличение уровня белков теплового шока (БТШ) в органах может защищать их от повреждений. Защитная роль БТШ была выявлена в исследованиях, как на культурах клеток, так и in vivo. На уровне сегодняшних представлений белки теплового шока многими авторами расцениваются как часть внутриклеточной стресс-лимитирующей системы, способствующей защите клетки от повреждения [49, 59, 145, 183]. Белки этого класса обладают шаперонной активностью, т. е. принимают участие в правильной укладке полипептидных

суспензиях неонатальных клеток сердца кролика на момент окончания культивирования в сравнении с суспензиями немодифицированных клеток сердца, которые были получены после выделения. Перечень образцов представлен в таблице 1.
Таблица 1 - Исследуемые суспензии клеток новорожденных кроликов
Серии экспериментов Вид модификации Параметры инкубации клеточных суспензий Количество образцов (п)
Время Воздействие
1. Контроль Без модификации
2. 3 часа 37 °С
3. Температурная модификация 1,5 часа 42 °С
4. 1.5 часа 1.5 часа 42 °С 37 °С
5. Воздействие антибиотиком 1,5 часа 37 °С с добавлением ампициллина в дозе 0,01 мг/мл среды
6. 1,5 часа 37 °С с добавлением ампициллина в дозе 0,03 мг/мл среды
7. 1,5 часа 37 °С с добавлением ампициллина в дозе 0,003 мг/мл среды
Всего
2.2 Общая характеристика эксперимента
Второй этап экспериментальных исследований был разделен на две части, что было необходимо для решения поставленных задач (табл. 2).
Животных содержали в условиях вивария при свободном доступе к воде и пище соответственно нормативам ГОСТа «Содержание экспериментальных животных в питомниках НИИ», все документы, регламентирующие работу вивария, имелись на протяжении всего времени исследования (виварий I категории, вет. удостоверение 238 №0015220 от 25 марта 2009 г., выдано службой ветеринарии Иркутской области). Эксперименты на животных выполнялись в соответствии с правилами гуманного обращения с животными, которые регламентированы «Правилами проведения работ с использованием эксперимен-