Разработка методов диагностики возбудителей черной ножки (Erwinia carotovora (Jones) Bergey et al. ) и кольцевой гнили (Clavibacter michiganensis subsp. sepedonicus (Spieck. et Kotth. ) Skaptasson et Burk. ) картофеля

• Автор: Белов, Григорий Леонидович
• Шифр специальности: 06.01.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 161 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Краткая характеристика изучаемых возбудителей бактериозов карто-

феля и меры борьбы с ними

1.2. Методы диагностики бактериозов картофеля

1.2.1. Иммунологические методы

1.2.1.1. Капельная агглютинация

1.2.1.2. Иммуноферментный анализ

1.2.1.3. Иммунофлуоресцентная микроскопия
1.2.2. Полимеразная цепная реакция
1.2.3. Другие методы
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ Глава II. МАТЕРИАЛ, ОЫЦИЕ МЕТОДИКИ И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1. Выделение и идентификация возбудителей бактериозов картофеля
2.1.1. Выделение и изоляция возбудителей бактериозов картофеля.
2.1.2. Оценка патогенности изолятов Ес и Сшэ лабораторным методом.
2.1.3. Методы изучения морфолого-культурных свойств бактерий
2.1.4. Тесты для идентификации бактерий
2.1.5. Тесты для отличия штаммов Еса от Есс
2.2. Получение антисывороток, антител и конъюгатов
2.2.1. Получение диагностических антисывороток
2.2.2. Получение антител
2.2.3. Получение конъюгатов
2.3. Схемы усовершенствованных и разработанных методов диагностики возбудителей бактериозов картофеля

2.3.1. Капельная агглютинация
2.3.2. Иммуноферментный анализ
2.3.3. Иммунофлуоресцентная микроскопия
2.3.4. Полимеразная цепная реакция
2.4. Полевой опыт

Глава III. ВЫДЕЛЕНИЕ В ЧИСТУЮ КУЛЬТУРУ ПАТОГЕННЫХ ИЗОЛЯТОВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ЧЕРНОЙ НОЖКИ И КОЛЬЦЕВОЙ ГНИЛИ КАРТОФЕЛЯ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ ФИЗИОЛОГОБИОХИМИЧЕСКИХ И СЕРОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
3.1. Выделение в чистую культуру и изучение физиолого-биохимических свойств патогенных изолятов возбудителей черной ножки и кольцевой гнили картофеля
3.2. Изучение серологических свойств полученных штаммов Ес и Стэ
Глава IV. ОТРАБОТКА МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БАКТЕРИОЗОВ КАРТОФЕЛЯ
5.1. Динамика накопления бактериальной инфекции Ес и С/их
5.2. Результаты тестирования растений картофеля в фазу бутонизции
5.3. Результаты тестирования растений картофеля в фазу цветения.
5.4. Результаты тестирования растений картофеля перед уборкой урожая
5.5. Результаты тестирования клубней картофеля
Глава V. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА МЕТОДОВ
ДИАГНОСТИКИ ВОЗБУДИТЕЛЯ КОЛЬЦЕВОЙ ГНИЛИ
НА РАСТЕНИЯХ т vitro

ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Принятые сокращения:
Ес - Егуппа еагойэуога;
Еса - Епупна сагофуога виЬзр. аРоБерРса;
Есс - Епупна сагоФуога БиЬэр. сагоруога;
Сдал- - СкуФасГег гтпсЫоапегшз зиЬвр. зеребошсиэ;
ИФА - иммуноферментный анализ;
йаз-ЕЫБА - "сэндвич" вариант иммуноферментного анализа; ЕЕЫБА - непрямой вариант иммуноферментного анализа;
ИФМ - иммунофлуоресцентная микроскопия;
НИФМ - непрямой вариант иммунофлуоресцентной микроскопии; ПЦР - полимеразная цепная реакция.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава II. МАТЕРИАЛ И ОБЩИЕ МЕТОДИКИ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ.
Исследования проводились в 1999-2002 г.г. в отделе биотехнологии ВНИИКХ путем постановки лабораторных и полевых опытов.
2Л. Выделение и идентификация возбудителей бактериозов картофеля.
2. 1. 1. Выделение возбудителей бактериозов картофеля в чистую культуру.
При выделении бактерий использовали общепринятую методику - способ последовательных разведений (Старыгина, 1960; Израильский, 1960, 1968; Бельтюкова, 1968; Капустин, 1968; Лазарев, 1989 и др.). Из пораженных образцов клубней картофеля вырезали сегмент ткани на границе больной и здоровой части, растирали в ступке. Затем наносили растирающим пестиком мазок в первую чашку Петри и распределяли по всей поверхности чашки шпателем Дригальского. Затем этим же шпателем растирали еще три (кольцевая гниль) или четыре (черная ножка) чашки, т.е. делали разведение. Ставили чашки Петри в термостат при 22-24 °С и через 1-2 (черная ножка) или 5-7 (кольцевая гниль) дней единичные колонии отсевали на косой картофельный агар в пробирках.
2.1.2. Оценка патогенности изолятов бактериозов лабораторным методом.
Для оценки патогенности выделенных изолятов возбудителей бактериозов использовали методы искусственного заражения.
Для пектолитических бактерий рода Епупна использовали метод заражения половинок клубней (Шнейдер, 1972). Клубни тщательно мыли, просушивали и стерилизовали поверхность спиртом. Затем их разрезали на две части,