Мониторинг популяций возбудителя рака картофеля и выявление источников устойчивости

• Автор: Хютти, Александр Валерьевич
• Шифр специальности: 06.01.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Санкт-Петербург, Пушкин
• Количество страниц: 225 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Распространение и вредоносность возбудителя рака картофеля

1.2. Биологические особенности возбудителя рака картофеля

1.2.1. Таксономия возбудителя

1.2.2. Морфология возбудителя

1.2.3. Симптоматика болезни

1.2.4. Цикл развития возбудителя рака картофеля

1.2.5. Биологическая специализация возбудителя

1.2.6. Эпидемиология возбудителя
1.3. Методы выявления, диагностики и определения жизнеспособности возбудителя рака картофеля
1.3.1. Сравнительный анализ методов выявления 8упску1гшт еЫоЫойсит из почвы
1.3.2. Сравнительный анализ методов определения жизнеспособности возбудителя рака картофеля
1.3.3. Молекулярная диагностика возбудителя рака картофеля
1.3.3.1. ПЦР диагностика возбудителя рака картофеля в почве
1.3.3.2. Метод ПЦР диагностики возбудителя рака картофеля в ростках восприимчивых сортов картофеля
1.4. Структура популяции Бупскушт епс1оЫойсит
1.4.1. Сорта-дифференциаторы, используемые для внутривидовой дифференциации патотипов возбудителя рака картофеля
1.4.2. Гетерогенность популяции возбудителя рака картофеля
1.5. Устойчивость картофеля к БупсЬуМит епс1оЫойсит 1Ъ
1.5.1. Источники и доноры устойчивости к возбудителю рака картофеля
1.5.2. Методы лабораторной диагностики устойчивости картофеля к БупскуМит епс1оЫойсит
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Растительный и инфекционный материал, использованный в экспериментальной работе
2.2. Методы выявления возбудителя рака картофеля
2.2.1. Законодательство
2.2.2. Методика отбора почвенных проб из зарегистрированных очагов рака картофеля в Ленинградской области
2.2.3. Микроанализ почвы на выявление зимних (покоящихся) зооспорангиев возбудителя рака картофеля
2.2.4. Лабораторный метод биологической проверки почвы на наличие возбудителя рака картофеля
2.3. Методы лабораторной диагностики устойчивости картофеля к БупсИуЯ-шт епс1оЫойсит
2.3.1. Законодательство
2.3.2. Заражение ростков картофеля в “компосте”, содержащем зимние (покоящиеся) зооспорангии БупскуМит епйоЫоИсит
2.3.3. Заражение ростков картофеля от свежих раковых наростов, содержащих быстропрорастающие летние зооспорангии
2.4. Методика выделения ДНК из растения-хозяина и раковых наростов различных географических популяций ЗупсЬуМит епс1оЫоНсит для последующего молекулярно-генетического анализа Глава 3. Распространение возбудителя рака картофеля в Ленинградской области Российской Федерации
3.1. Выявление возбудителя рака картофеля в почвенных образцах, отобранных из зарегистрированных карантинных очагов, экспресс-методом
3.2. Биологическая проверка почвы, отобранной из зарегистрированных карантинных очагов в Ленинградской области, на наличие возбудителя рака картофеля

Глава 4. Разработка метода ПЦР диагностики зимних (покоящихся) зооспорангиев БупскуЫит епс1оЫоИсит, экстрагированных из почвенных образцов экспресс-методом
4.1. Отработка методических приемов проведения видоспецифичной ПЦР с единичными зимними зооспорангиями У. епс1оЫоНсит
4.2. Проведение видоспецифичной ПЦР с зимними зооспорангиями 5. егкЛоЫоисит, экстрагированными из почвенных образцов экспресс-методом
Глава 5. Изменчивость географических популяций возбудителя рака картофеля
5.1. Идентификация патотипного состава географических популяций БупсИуМит епс1оЬюИсит на объединенном наборе сортов-дифференциаторов
5.2. Сравнительный анализ географических популяций возбудителя рака картофеля с использованием ДНК-маркеров
5.2.1. Сравнительный молекулярно-генетический анализ географических популяций возбудителя рака картофеля с использованием ДНК-маркеров
5.2.2. Отработка методических приемов получения ДНК из зимних зооспорангиев £ епс!оЫоИсит для последующего молекулярногенетического анализа 173 Глава 6. Оценка межвидовых гибридов картофеля селекции ГНЦ
РФ ВНИИР на устойчивость к БупскуЫит епйоЫойсит
Выводы
Практические рекомендации
Список использованной литературы

M. Noble и М. Glynne (1970) для определения жизнеспособности рака картофеля использовали люминесцентный метод. Стенки жизнеспособных зооспорангиев, при предварительном замачивании в лактофеноле и последующем облучении длинноволновыми ультрафиолетовыми лучами светились тусклым красным цветом, а их содержимое - бледным сине-зеленым цветом. Погибшие и пустые зооспорангии флуоресцируют только тусклым красным светом. М.С. Hampson (1975) установил, что зооспорангии патотипа 2 (G1) обладают очень слабым флуоресцированием, что затрудняет определение жизнеспособности.
Обработку покоящихся зооспорангиев лактофенолом с использованием специальных фильтров предложила М.A. Pratt (1976а). Жизнеспособные зооспорангии флуоресцируют, а не жизнеспособные - нет. В последующем ОЕРР/ЕРРО (1999) предложила заменять лактофенол лактоглицеролом.
Н.Е. Сурнакова (1984) в качестве флуоресцирующих красителей использовала нитросиний тетразолий, неотетразолий хлористый, диацетат-флуоресцин и акридиновый оранжевый. При использовании флуоресцентного микроскопа видно, что ярко-светящиеся зооспорангии являются жизнеспособными, темные - нежизнеспособными, а серые -проросшими.
В.А. Яковлева (1986) также предложила окрашивать зооспорангии флуоресцирующим веществом, таким как бромистый этидий, в течение 40 минут. Надо заметить, что данное вещество очень токсично и является сильным канцерогеном.
В бывшем СССР для определения жизнеспособности зооспорангиев чаще всего использовался метод плазмолиза (Дорожкин и др., 1951а, 19516, 1952; Шариков, 1951а, 19516, 1954, 1955, 1957). Метод плазмолиза основан на свойстве живой протоплазмы сравнительно легко пропускать воду и задерживать растворенные в ней вещества. В качестве плазмолизирующих растворов рекомендуется использовать хлористый натрий, азотнокислый натрий, хлористый аммоний и азотнокислый аммоний (Дорожкин и др., 1952;