Некоторые особенности структуры популяции Phytophthora infestans (Mont. ) de Bary на Европейской территории Российской Федерации

• Автор: Кравцов, Алексей Сергеевич
• Шифр специальности: 06.01.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 97 с. : ил

Оглавление Введение Цели работы
Глава 1. Обзор литературы
1. Описание заболевания
1.1. Вредоносность
1.2.Симптомы болезни
1.3.Биология возбудителя заболевания
2. Динамика популяций Р.тГе51аш
2.1.Происхождение и мировое распространение патогена
3. Генетические маркеры в изучении популяций Рлтй^апБ
3.1.Селективно нейтральные маркеры: полиморфизм электрофоретически разделенных белков полиморфизм митохондриальной ДНК
3.2.Селективно значимые маркеры: тип спаривания и образование ооспор агрессивность и вирулентность Рлп1ез1ап
4. Обзор лабораторных методов изучения признака агрессивности Р.цД^апБ
Глава 2. Основные материалы и методы
Результаты и обсуждение
Глава 3. Изучение поуляций РЛгНе$1апз
1. Изучение типов спаривания популяций Р.тГе51аш на Европейской территории Российской Федерации
2. Сравнение гаплотипов митохондриальной ДНК и изоферментных локусов регионально отдаленных популяций Р.тГе51ап
на Европейской территории Российской Федерации
3. Изучение происхождения и морфологии ооспор в подмосковных популяциях Р.ЬД^аш
4. Сравнение полевого и лабораторного методов оценки частичной устойчивости сортов картофеля к Р.тГеБІаш
5. Сравнение степени агрессивности некоторых региональных популяций Р. іпГезіапБ
6. Сравнение показателя агрессивности с некоторыми другими признаками, характеризующими популяцию Р. пй^апБ
Общие выводы и рекомендации производству
Благодарности
Список опубликованных
печатных работ по теме диссертации
Список цитированной литературы
Приложение
Введение
Картофель принадлежит к числу важнейших сельскохозяйственных культур. В мировом производстве продукции растениеводства картофель, занимает одно из ведущих мест, наряду с пшеницей, кукурузой, рисом.
Российская Федерация занимает одно из лидирующих положений в мире по уровню валового производства картофеля. Доля России в мировом производстве этой культуры составляет около 10%. В 2002 г. в хозяйствах всех категорий Российской Федерации картофель выращивался на площади 3,2 млн. гектаров, валовой сбор составил 31,2 млн.т. (данные Министерства сельского хозяйства России).
К числу важнейших проблем в большинстве стран, производящих картофель, относятся существенные потери урожая, из-за поражения культуры различными вредителями, болезнями и, в частности, фитофто-розом.
В России потери урожая картофеля от фитофтороза колеблются от 10 до 60% в зависимости от региональных природно-климатических, агрометеорологических условий выращивания, устойчивости сортов и других факторов и составляют в среднем 4 млн. тонн в год (Наумова, 1961; Локтина, 1969; Дорожкин и др., 1976; Попкова, 1989; Филиппов и др., 2001).
Среди основных мероприятий, направленных на сокращение потерь урожая картофеля от фитофтороза, в настоящее время наиболее эффективными являются химические методы защиты и возделывание устойчивых сортов.
Методы химической защиты позволяют существенно сократить потери урожая клубней, однако имеют существенные недостатки. С экономической точки зрения они являются дорогостоящими, так как требуют больших затрат на закупку препаратов и проведение химических обработок значительных площадей, занятых под картофелем. С биологической -могут приводить к нарушению естественных биоценозов, что имеет большое значение с точки зрения охраны окружающей среды.

Жидкую гороховую среду готовили по общепринятой методике из расчета 150 г свежего быстрозамороженного зеленого горошка на 1л кипящей дистиллированной воды в течение 15 мин. Готовую среду остужали, разливали по колбам через 1 слой марли и автоклавировали 30 минут при 1 атмосфере.
Гаплотипы митохондриальной ДНК (мтДНК) определяли по методике, разработанной Гриффитцем и Шоу (Griffith, Shaw, 1998).
Образцы мицелия хранили при температуре -20”С в холодильнике завернутыми в фольге в герметичной таре, предварительно промыв на воронке Бюхнера и подсушив.
Выделение ДНК для ПЦР - анализа осуществляли по модифицированной нами методике Гриффитца и Шоу (1998) в следующей последовательности:
1. Мицелий P. infestans брали пинцетом из жидкой среды и переносили в фарфоровую чашку с гриндерем.
2. Заливали жидким азотом и растирали до порошкообразного состояния в предварительно промороженной чашке.
3. Из фарфоровой чашки порошок мицелия переносили в пробирку Эппендорф на 1.5 мл, добавляли 800 мкл СТАБ-буфера (ли-зирующий буфер) и перемешивали все на вортексе. Затем, пробирки фиксировали на плотике и ставили в баню на 1 час при 65 °С перемешивая на вортексе каждые 10 мин.
СТАБ-буфер (на 1 литр): ТРИС PH 8,0 ЮОшМ
NaCl 1,4М
ЭДТА PH 8,0 20шМ
СТАВ твердый 2% (W/V)
3. Добавляли 500 мкл хлороформа (изоамиловый спирт 24:1). Центрифугировали 10 мин. и переносили около 700 мкл супернатанта в новую пробирку каждый раз меняя насадку.
4. Добавляли 400 мкл изопропанола + СНзСООК (1/10 объема, 5М, Рн=4,6). Перемешивали на вортексе и центрифугировали 10 мин.