Анализ и моделирование параметров иммунной системы как прогностического фактора при заболеваниях кожи

• Автор: Маланчук, Андрей Валентинович
• Шифр специальности: 05.13.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 106 с. : 6 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Прогнозирование и моделирование заболеваний кожи неканцерогенного и канцерогенного генеза

1.2. Этиология и состояние иммунологической реактивности при меланоме кожи

1.3. Особенности иммунологических реакций при заболеваниях кожи не канцерогенного генеза

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объем материала и основные принципы построения алгоритма исследования

2.2. Методы иммунологического анализа

2.3. Методы моделирования параметров иммунной системы с использованием описательной статистики

2.4. Методы моделирования с использованием корреляционного анализа

2.5. Проверка адекватности построенной модели
ГЛАВА 3. АЛГОРИТМИЗАЦИЯ ОТБОРА КОМПОНЕНТОВ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ДЛЯ ВКЛЮЧЕНИЯ В МОДЕЛЬ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИДА И ТЯЖЕСТИ ЗАБОЛЕВАНИЙ КОЖИ
3.1. Моделирование вклада показателей иммунной системы в динамику заболеваний кожи на основе параметров описательной статистики
3.2. Моделирование значимости вклада показателей иммунной системы в динамику заболеваний кожи на основе корреляционного анализа
3.3. Отбор компонентов для построения модели прогнозирования вида и тяжести заболеваний кожи на основе использования степени иммунологических расстройств и формулы расстройств иммунной системы

ГЛАВА 4.0ЦЕНКА ТОЧНОСТИ И СПЕЦИФИЧНОСТИ МОДЕЛЕЙ ПРОГНОЗИРОВАНИЕ ВИДА И СТЕПЕНЬ ТЯЖЕСТИ ЗАБОЛЕВАНИЙ КОЖИ ПОСТРОЕННЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ АЛГОРИТМОВ ОТБОРА ЗНАЧИМЫХ КОМПОНЕНТОВ
4.1. Построение модели на основе полной матрицы
4.2. Минимизация компонентов для построения модели с учетом результатов предварительного отбора методами традиционного анализа.

4.3. Минимизация компонентов для построения модели с учетом результатов предварительного отбора по результатам регрессионного
анализа
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ЛИТЕРАТУРА
ПРИЛОЖЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ.
Актуальность.
Кожа является органом, постоянно контактирующим с агрессивными факторами внешней среды, кроме того, этот орган активно реагирует на наличие внутренних патологических процессов (Кубанова A.A., 1998, 2005). Особенности строения, разнообразие функций и большое число внешних и внутренних факторов, воздействующих на кожу, обусловливают многообразие её заболеваний, требующих своевременной, точной диагностики и лечения (Ситкевич А.Е., 1997; Гандарова З.Б., 2000).
В частности, одним из наиболее распространенных инфекционных болезней человека является рожа - заболевание кожи не канцерогенного генеза (Черкасов B.JL, 1986; Бурданова Т.М., 2007). К числу
неблагоприятных последствий перенесенного рожистого воспаления относится развитие хронических рецидивирующих форм этого заболевания. Ранний и точный прогноз течения рожи представляет на сегодняшний день весьма актуальную задачу (Панютич А.В. с соавт, 1995; Амбалов Ю.М. с соавт, 1998, Ковтун Э.А., 2008). Регистрируемая в России заболеваемость рожей на протяжении многих десятилетий не имеет тенденции к снижению, составляя в среднем 15-20 на 10 тысяч населения (Ратникова Л.И., с соавт. 2006, 2007, Бурданова Т.М., 2007).
Большую проблему представляют и заболевания кожи канцерогенного генеза. В 2000 году в мире, по данным Международного агентства по исследованию рака (МАИР) (Лион), было зарегистрировано более 10 млн. случаев заболевания злокачественными опухолями (30), а в 2020 году число вновь выявленных случаев 30 достигнет 16 млн. (Тымчишина М.В., 1999; Мерабишвили В.М., Чепик О.Ф., 2006, Haenssle Н.А. et al., 2009; Staudt M.R. et al., 2009). Среди злокачественных новообразований 132000 случаев заболевания составляет меланома, самая опасная форма рака кожи, при которой чрезвычайно высок процент смертельных исходов — по оценкам экспертов 66000 случаев ежегодно в результате этого заболевания
Методика постановки непрямой реакции поверхностной иммуно флюоресценции:
1) в центрифужную пробирку вносят 50 мкл предварительно подготовленной суспензии лимфоцитов, содержащей 4-20 млн. клеток в 1 мл и 20 мкл рабочего раствора моноклональных антител, инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре;
2) затем клетки трижды отмывают в мл физиологического раствора (центрифугирование с ускорением 200 g (1000 об/мин) 1-ый раз 45 минут, 2-ой и 3-ий - 10-15 минут);
3) супернатант тщательно удаляют, а клеточный осадок суспензируют в 20 мкл рабочего раствора Р1ТС - коньюгата вторичных антител, инкубируют в течение 30 минут при 4°С, после чего трижды промывают физиологическим раствором (см.п.2);
4) полученный после центрифугирования осадок переносят на предметное стекло, высушивают на воздухе и фиксируют 96% спиртом;
5) учет результатов проводят методом флуоресцентной микроскопии с применением набора фильтров возбуждающего света, конденсоров, запирающих светофильтров, предназначенных для работы с ФИТЦ и ТРИТЦ, используют объектив 90 х и окуляр 7 - 10 х;
6) результаты реакции учитывают в течение 24 часов после ее выполнения, препараты предохраняют от воздействия прямого интенсивного света, микроскопирование производят в тщательно затемненном помещении;
7) при работе с люминесцентным микроскопом объектив осторожно помещают в лунку на стекле, используя 50% раствор глицерина, приготовленного на фосфатном буфере, в качестве иммерсионной среды;
8) в одном образце- просчитывают 200 - 500 лимфоцитов, положи тельным результатом являются светящиеся по перифериям ( в форме кольца) клетки;