Фенотип и дифференцировка стволовых клеток амниотической жидкости человека in vitro

• Автор: Давыдова, Дарья Александровна
• Шифр специальности: 03.03.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 134 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Амниотическая жидкость: происхождение, функции, состав

1.2. Общая характеристика клеток амниотической жидкости

1.3. Стволовые клетки из амниотической жидкости

1.4. Потенции стволовых клеток амниотической жидкости к дифференцировке in vitro

1.4.1. Остеогенная дифференцировка

1.4.2. Адипогенная дифференцировка

1.4.3. Хондрогенная дифференцировка
1.4.4. Миогенная дифференцировка
1.4.5. Дифференцировка в кардиомиоциты
1.4.6. Дифференцировка в эндотелиальные клетки
1.4.7. Кроветворные клетки
1.4.8. Дифференцировка в гепатоциты
1.4.9. Дифференцировка в Р-клетки поджелудочной железы
1.4.10. Нейральная дифференцировка
1.5. Трансплантация стволовых клеток амниотической жидкости без предварительной дифференцировки in vitro
1.5.1. Мечение клеток перед трансплантацией
1.5.2. Интеграция клеток в ткани почки
1.5.3. Интеграция и дифференцировка в клетки эпителия легкого
1.5.4. Интеграция СК АЖ в ткани кишечника
1.5.5. Интеграция СК АЖ в ткани печени
1.5.6. Трансплантация СК АЖ при инфаркте миокарда
1.5.7. Трансплантация СК АЖ и мионекроз
1.5.8. Трансплантация СК АЖ при повреждении периферических нервов
1.6. Получение индуцированных плюрипотентных клеток из стволовых клеток амниотической жидкости
II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ПЛ. Культивирование клеток из амниотической жидкости
11.2. Сканирующаяэлектронная микроскопия
11.3. Проточная цитофлуориметрия
11.4. Иммуноцитохимия
П.5. ОТ-ПЦР
11.6. Клонирование стволовых клеток амниотической жидкости
11.7. Индукция дифференцировок стволовых клеток амниотической жидкости
11.7.1. Индукция остеогенеза
11.1.2. Индукция адипогенеза
ІГ.7.3. Индукция миогенеза
11.7.4. Дифференцировка в гепатоциты
11.7.5. Дифференцировка в эпидермальные клетки
11.8. Культивирование стволовых клеток амниотической жидкости в трехмерном коллагеновом матриксе
' П.8.1. Выделение коллагена из хвостов крыс
ІІ.8.2 Приготовление коллагенового геля
11.8.3. Включение BrdU
II.8.4: Электронно-микроскопическое исследование СК АЖ, культивированных в коллагеновом геле
11.9. Индукция экспрессии в стволовых клетках амниотической жидкости молекул главного комплекса гистосовместимости интерфероном-у
II. 10. Трансплантация стволовых клеток амниотической жидкости иммунодефицитным животным
III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
III. 1. Культивирование клеток из амниотической жидкости
111.2. Сканирующая электронная микроскопия
111.3. Характеристика фенотипа по экспрессии молекулярных маркеров
III.3.1. Иммуноцитохимический анализ

Ш.3.2. Проточная цитофлуориметрия
Ш.З.З. Двойное иммуноцитохимическое окрашивание
Ш.3.4. ОТ-ПЦР
Ш.4. Дифференцировка стволовых клеток амниотической жидкости
Ш.4.1. Остеогенная дифференцировка
Ш.4.2. Адипогенная дифференцировка
Ш.4.3. Эпидермальная дифференцировка
Ш.5. Трансплантация стволовых клеток амниотической жидкости
иммунодефицитным животным
Ш.6. Клонирование стволовых клеток амниотической жидкости
Ш.6.1. Морфологическая характеристика клонированных клеток
Ш.6.2. Иммуноцитохимический анализ клонированных клеток
Ш.6.3. Дифференцировка клонированных клеток
111.6.3.1 Остеогенная дифференцировка
Ш.6.3.2. Миогенез
1П.6.3:3. Дифференцировка в гепатоциты
III.7. Стволовые клетки амниотической жидкости в трехмерном
коллагеновом матриксе
Ш.7.1. Культивирование СК АЖ в коллагеновом геле
Ш.7.2. Электронно-микроскопическое исследование СК АЖ,
культивированных в геле
Ш.7.3. Иммуноцитохимический анализ СК АЖ, культивированных в
геле
Ш.8. Актиновые микрофиламенты в стволовых клетках амниотической
жидкости
Ш.9. Индукция интерфероном-у
IV. ОБСУЖДЕНИЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ

1.5.7. Трансплантация СКАЖимионекроз
При трансплантации недифференцированных c-kit+ СК АЖ человека в скелетную мышцу, одновременно с индукцией мионекроза, клетки остаются жизнеспособными в течение 30 сут. При этом не наблюдается признаков воспаления или отторжения, а также образования опухолей. В то же время не происходит дифференцировки в миогенном направлении. Клетки формируют трубчатые структуры, напоминающие протоки экзокринных желез. Таким образом, помещение СК АЖ в условия in vivo недостаточно для их дифференцировки в миогенном направлении (Gekas et al., 2010).
Показано, что в случае криодеструкции стенки мочевого пузыря с последующей трансплантацией СК АЖ крысы в зону повреждения, через 30 сут лишь небольшая часть введенных клеток обнаруживается в стенке сосудов. Дифференцировки'СК АЖ и замещения поврежденной мышечной ткани не наблюдается. Эффект терапии сводится к предотвращению компенсаторной гипертрофии сохранившихся после повреждения мышечных клеток стенки мочевого пузыря, т.е. обусловлен паракринным воздействием СК АЖ (De Coppi et al., 2007b).
1.5.8. Трансплантация СК АЖ при повреждении периферических
нервов

МСК из АЖ человека и крысы могут восстанавливать повреждения периферических- нервов посредством секреции нейротрофических факторов (Pan et al., 2006, 2007). Введение СК АЖ человека в сочетании с гранулоцитарным колоние-стимулирующим фактором (G-CSF), являющимся противовоспалительным и антиапоптотическим агентом, приводит к