Цитоархитектоника и свойства поверхности лимфоцитов у здоровых людей (доноров) и при развитии лимфопролиферативных процессов на основе атомно-силовой микроскопии

• Автор: Сладкова, Евгения Анатольевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Белгород
• Количество страниц: 172 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ БЕЛОЙ КРОВИ В НОРМЕ И ПРИ ЛИМФО-И МИЕЛОПРОЛИФЕРАТИВНЫХ ПРОЦЕССАХ
1.1. Развитие лейкоцитов. Регуляция лейкопоэза
1.1.1. Развитие нейтрофилов и лимфоцитов
из гемопоэтической стволовой клетки
1.1.2. Нейрогуморальная регуляция лейкопоэза
1.2. Морфофункциональная организация лейкоцитов
здоровых людей
1.3. Общая характеристика лейкозов
1.3.1. Механизмы возникновения лейкозов
1.3.2. Классификация лейкозов
1.3.3. Реологические свойства крови больных лейкозом
1.4. Морфофункциональная организация лейкоцитов
больных лейкозом
1.5. Митогены, механизмы действия
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Организация эксперимента
2.2. Общий клинический анализ крови и цитохимическая диагностика лейкозов
2.3. Морфофункциопальные методы исследования лимфоцитов .
2.3.1. Культивирование лимфоцитов
2.3.2. Методы исследования клеток крови на АСМ
2.3.3. Изучение функциональной активности лимфоцитов
2.3.4. Морфологические методы анализа цитологических фиксированных препаратов лимфоцитов
2.4. Методы статистической обработки
Глава 3. ЦИТОАРХИТЕКТОНИКА И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ
ЗДОРОВЫХ ЛЮДЕЙ И БОЛЬНЫХ ЛЕЙКОЗОМ
3.1. Гематологические показатели крови больных лейкозом .
3.2. Структурно-функциональные свойства лимфоцитов крови больных лейкозом и здоровых людей

Глава 4. ЦИТОАРХИТЕКТОНИКА И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА МИТОГЕН-СТИМУЛИРОВАННЫХ ЛИМФОЦИТОВ
4.1. Структурно-функциональные свойства
Кон А-стимулированных лимфоцитов
4.2. Структурно-функциональные свойства
ФГА-стимулированных лимфоцитов
4.3. Сравнительный анализ структурно-функциональных
свойств лимфоцитов в условиях митогенной стимуляции .
Глава 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Действие целого спектра стимулов (вирусов, канцерогенов и т.п.) наряду с трансформацией функционального состояния клетки сопровождается изменением структуры ее поверхности, что в итоге приводит к появлению у нее новых биологических свойств (Wroblewski J.M. et al., 2002; McLead I.X. et al., 2011). В зависимости от природы и интенсивности возмущающего воздействия, адаптивные реакции клеток проявляются неодинаково, однако общим их признаком является изменение формы и цитоархитектоники поверхности (Wolf К. et al., 2003). В связи с этим одной из актуальных проблем клеточной биологии является изучение функциональных свойств и структуры поверхности лимфоцитов в норме и при патологии (например, развитии опухолей в системе крови). Решение данной проблемы позволит установить ранние изменения структурно-функциональных свойств лимфоцитов, характерных для неопластической клетки, а также разработать терапевтические подходы, направленные на уничтожение аномальных клеток.
Степень разработанности темы исследования. В настоящее время в литературе представлены данные многочисленных научных исследований, касающихся вопросов опухолевого перерождения клеток (Зуева Е.Е., 2008; Тамкович С.Н. и др., 2008; Чеботкевич В.Н. и др., 2010), метастазировапия и образования лейкостазов (Сорокин Ю.Н. и др., 2013). Е1арушение пролиферации и дифференцировки лимфоцитов при развитии лимфопролиферативных заболеваний обусловлены изменением их генетической и метаболической систем (Lopez J.I. et al., 2008), что отражается на особенностях их метастатического потенциала, механизмах формирования и функционирования поверхностного аппарата клетки (Шутова М.С., 2010; Dong С. et al., 2005; Kraning-Rush С.М. et al., 2012). Доказано, что процесс развития неопластических лимфоидных клеток сопровождается изменением заряда (Тарасова И.М., 1985) и свойств плазмалеммы (Горло Е.И., 2000). Несмотря на многочисленные экспериментальные данные, представленные в источниках литературы, открытым остаётся вопрос об особенностях цитоархитектоники, механических и электрических свойств клеточной поверхности, изменяющихся в процессе опухолевого перерождения.
Решение данной проблемы стало возможным благодаря внедрению в экспериментальные исследования технологий сканирующей зондовой мик-

ставлять 3 - 10% от всех потенциально связывающих участков (Гуковская A.C., 1984).
Наиболее ранним признаком активации лимфоцитов ФГА является увеличение скорости синтеза белка к 8 часу взаимодействия клеток и митогена. Увеличение размеров лимфоцитов начитается с 16 часа активации (Ferris et al., 1988). Узкое исходное распределение лимфоцитов по размерам после активации становится более широким: через 16 часов активации доля бластов составляет 25-30%, через 48 часов - 65% от общего числа клеток. Увеличение количества бластных форм сопровождается нарастанием удельного содержания калия в клетках. Синтез ДНК в активированных лимфоцитах начинается с 24 часа и достигает максимума в интервале 48-72 часов (Веренинов A.A. и др., 1991).
Клетки больных лейкозом не зависимо от типа гемобластоза, обладают сниженной восприимчивостью к действию митогенов, по сравнению с лимфоцитами здоровых людей, что объясняется меньшим количеством сайтов связывания для Кон А или ФГА на поверхности клеток. Установлено, что анеуплоидные клетки при острых лейкозах после митотического деления, стимулированного ФГА, переходят в диплоидные (Michaeli J., 1986).
По данным литературы, несмотря на различия в химической организации Кон А и ФГА, механизм активации лимфоцитов этими митогенами сходен. Основную роль в стимуляции клеток играет концентрация митогена и количество рецепторов связывания для него на клеточной поверхности (Hayashi S. et al., 1993). Показано, что механизмы действия митогенов и пути клеточного ответа состоят из двух этапов: 1) CD2- или С05-зависимая активация экспрессии генов ИЛ-2; 2) пролиферативный ответ лимфоцитов на ИЛ-2 (Gringhuis S. et al., 1997).
В литературных источниках не удалось найти данных о различиях CD2-и СБ5-путей активации. Общие механизмы сигнальных каскадов от воздействия митогена на молекулы CD2 и CD5 до выработки лимфоцитом ИЛ-2 показаны на схеме 1.