Реконструкция эпителиальных дефектов уретры и трахеи кролика с помощью живого эквивалента кожи

• Автор: Роговая, Ольга Сергеевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 137 с. : ил.

Оглавление
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Стволовые клетки эпидермиса

1.2 Ниши стволовых клеток

1.3 Идентификация стволовых и транзиторных клеток эпидермиса in vivo и in vitro.

1.3.1 Поверхностные маркеры

1.3.2 Кератины

1.3.3 Маркеры клеточной пролиферации и внутриядерные маркеры эпителиальных клеток

1.4 Использование зеленого флуоресцентного белка (GFP) для мечения клеток

1.5 Пластичность тканеспецифичных стволовых клеток
1.6 Тканевая инженерия
1.6.1 Использование искусственных подложек и трехмерных гелей для создания
тканеинженерных конструкций
1.6.2 Культивирование фибробластов в трехмерном коллагеновом геле
1.6.3 Получение пластов кератиноцитов в культуре
1.7 Тканеинженерные подходы для восстановления эпителиальных дефектов
1.7.1 Восстановление дефектов трахеи с использованием тканевой инженерии
1.7.2 Восстановление уротелия при помощи трансплантации клеток
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Выделение и культивирование постнатальных фибробластов человека
2.2 Получение эмбриональных фибробластов человека
2.3 Культивирование фибробластов
2.4 Выделение и культивирование кератиноцитов кролика
2.5 Выделение и культивирование кератиноцитов человека

Дестратификация пластов культуры кератиноцитов

2.7 Культивирование фибробластов на носителях
2.8 Выделение коллагена
2.9 Приготовление коллагенового геля
2.10 Тест на контракцию коллагенового геля
2.11 Приготовление и культивирование живого эквивалента кожи на основе фибробластов и кератиноцитов человека дли экспериментов in vitro
2.12 Приготовление живого эквивалента кожи на основе аллогенных кератиноцитов и
фибробластов кролика для восстановления трахеи
2.13 Приготовление живого эквивалента кожи на основе аутологичных кератиноцитови
фибробластов кролика для трансплантации в дефект уретры
2.14 Мечение клеток трейсером
2.15 Лентнвирусная трансфекция культуры кератиноцитов
2.16 Гистологические исследования
2.16.1 Приготовление парафиновых срезов
2.16.2 Приготовление криосрезов
2.16.3 Иммуногистохимические исследования препаратов
2.17 Исследования препаратов пластов кератиноцитов на конфокальном микроскопе
2.18 Определение жизнеспособности культуры фибробластов человека в коллагеновом геле с использованием флуорохромов в ультрафиолетовом свете
2.19 Метод подсчета в полях зрения
2.20 Статистические методы обработки данных
2.21 Методика реконструкции экспериментального дефекта трахеи кролика
2.22 Методика реконструкции экспериментального дефекта уретры кролика
2.23 Материалы и реактивы, используемые в работе
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Исследование живого эквивалента кожи in vitro

3.2 Поведение фибробластов в коллагеновом геле
3.3 Обогащение культуры кератиноцитов клетками, обладающими большим пролиферативным потенциалом
3.4 Характеристика кератиноцитов кожи человека, выращенных на поверхности коллагенового геля
3.5 Использование живого эквивалента кожи в качестве транспланта при замещении экспериментального дефекта трахеи
3.6 Исследование аутологичных кератиноцитов, трансплантированных в составе живого эквивалента кожи в уретру кролика
3.6.1 Трансплантация кератиноцитов, меченных мембранным трейсером..
3.6.2 Трансплантация клеток содержащих генетическую метку
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ:
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ная - она представлена мелкими гребнями, при микроскопическом исследовании препаратов уретры можно различить вертикальную анизоморфность эпителия уретры и наличие трех зон: покровной (поверхностный), промежуточной и базальной. Особенность поверхностных клеток уротелия обусловлена содержащимися в них белковыми комплексами, которые в каждой клетке состоят из пяти субъединиц уроплакина: четыре основных (la, lb, II, и Ша) и одной дополнительной (ШЬ) и образуют так называемые уретральные бляшки или ассиметричную мембрану поверхностных клеток. Синтезирующие UP клетки являются конечной стадией дифференцировки эпителия мочеточников, мочевого пузыря и проксимальной части уретры. Функция уретральных бляшек — обеспечение непроницаемости клеток для мочи. Нокаут гена уроплакина приводит к нарушению барьера проницаемости (Hu et al., 2002, 2004). Кроме UP, эпителиальные клетки проксимальных отделов уретры содержат кератины К7 и К20 (Ramos et al., 2003; Liang et al., 2005). Значительная часть клеток уротелия содержит кератин 18 (маркер эпителия протоков желез). В эпителии дистального отдела уретры часть клеток окрашивается антителами к К14, характерному для клеток базального слоя кожи человека. В эмбриогенезе образование уротелия происходит путем миграции в растущую уретру клеток энтодермального происхождения из мочевого пузыря. Меньшее значение в образовании уротелия играет миграция клеток эктодермы в растущую уретру и мочевой пузырь. Наличие клеток различного фенотипа в составе эпителия уретры согласуется с данными о смешанном эмбриональном происхождении уротелия (Romih et al., 2005).
Лечение гипоспадии с применением методов тканевой инженерии. Ги-поспадия - аномалия анатомического строения пениса у мальчиков, при которой мочеиспускательный канал сильно короче нормы, а отверстие мочеиспускательного канала смещено вниз, вплоть до нахождения вообще не на головке, а снизу на теле полового члена, на мошонке или в промежности. Данная патология сопровождается расщеплением препуциального мешка (крайней плоти) и деформацией полового члена. Частота встречаемости составляет