Роль альфа-синуклеина в механизмах сопряжения процессов нейровоспаления и нейродегенерации в черной субстанции мозга крыс

• Автор: Сергеева, Татьяна Николаевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Ижевск
• Количество страниц: 160 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Роль альфа-синуклеина в патофизиологических механизмах болезни Паркинсона

1.1.1. Характеристика Болезни Паркинсона и других синуклеопатий

1.1.2. Болезнь Паркинсона и мутации в гене альфа- синуклеина

1.1.3. Биохимическая структура альфа-синуклеина

1.1.4. Агрегация альфа-синуклеина и нейродегенерация

1.2 Клеточные механизмы нейровоспаления

1.2.1. Отличительные особенности нейровоспаления
1.2.2. Микроглия как ключевой участник нейровоспалительного 26 процесса
1.2.3. Роль астроглии в нейровоспалении
1.2.4. Реакции клеточных элементов гематоэнцефалического барьера на 35 нейровоспаление
1.2.4.1.. Эндотелий 3
1.2.4.2. Перициты
1.2.5 Вовлеченность мигрирующих в нервную ткань лимфоцитов в 41 нейровоспалительные процессы
1.2.6. Концепция нейроваскулярной единицы
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Организация исследования
2.2. Введение вирусного вектора, А-син и бактериального эндотоксина в 53 черную субстанцию мозга
2.3. Гистологический анализ
2.4. Электронномикроскопический анализ

2.5. Иммуногистохимический анализ
2.6. Подсчет клеток и плотности волокон
2.7. Измерение интенсивности флуоресцентного свечения
2.8. Биохимический анализ (Вестерн-блоттинг)
2.9. Статистический анализ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Перенос рААВ в ДА-эргические нейроны черной субстанции мозга
3.2. Межвидовые различия способности гиперэкспрессированного в ДА- 62 эргических нейронах А-син человека и крысы индуцировать нейродегенерацию
3.3. Гиперэкспрессия в ДА-эргических нейронах А-син человека и крысы 67 вызывает образование в нейронах агрегатов А-син
3.4. Векторный перенос в ДА нейроны ЧС крыс гена А-син вызывает 69 рост концентрации А-син и падение тирозингидроксилазы в стриатуме
3.5. Индукция повышенной экспрессии А-син в ДА нейронах ЧС 72 вызывает провоспалительную активацию м икроглиоцитов
3.6. Изменение фенотипа активированных микроглиоцитов зависит от
интенсивности нейродегенерации
3.7. Индукция повышенной экспрессии уровней А-син в 77 дофаминергических нейронах черной субстанции вызывает гиперэкспрессию глиального кислого фибриллярного белка в астроцитах
3.8. Индукция повышенной экспрессии А-син в дофаминергических 80 нейронах черной субстанции сопровождается сосудистой реакцией и инфильтрацией лимфоцитов в область введения вектора
3.9. Интраперитонеальное введение кортикостерона снижает 81 интенсивность гибели дофаминергических нейронов, индуцированной введением в дофаминергические нейроны рекомбинантного гена А-син

человека, нормализует уровень дофамина в стриатуме, но не влияет на экспрессию А-син
3.10. Унилатеральное введение ЛПС и А-син в ЧС индуцирует в области 83 введения нейровоспаление (активацию микро- и астроглии, сосудистую реакцию и инфильтрацию лимфоцитов), но не вызывает выраженной нейродегенерации
3.11. Унилатеральное введение липополисахарида в ЧС вызывает 95 дисфункцию А-син в ДА нейронах ЧС и дегенерацию синапсов в стриатуме
ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

(FasL) на астроцитах, что индуцирует апоптоз Т-клеток, контактирующих с ними [Choi C. et al., 1999].
Включения альфа-синуклеина обнаруживаются в астроцитах и олигодендроцитах пациентов с БП [Wakabayashi K. et al., 2000] и амиотрофическом латеральном склерозе [Mezey E. et al., 1998]. Культивируемые астроциты человека и клетки астроцитарной линии U251 экспрессируют мРНК альфа-синуклеина и сам протеин [Tanji K. et al., 2001]. Кроме того, они способны захватывать внеклеточные тельца Леви [Togo Т. et al., 2001].
Добавление к культивируемым астроцитам человека нативной или мутантной форм неагрегированного альфа-синуклеина повышает экспрессию ими молекул ICAM-1 (СД54) и стимулирует синтез и секрецию Ил-6, причем мутантные формы оказывают более выраженное стимулирующее действие [Klegeris A. et al., 2006].
1.2.4. Реакции клеточных элементов гематоэнцефалического барьера на нейровоспаление
Гематоэнцефалический барьер (ГЭБ) выполняет роль физического и метаболического барьера, который к тому же за счет наличия избирательных транспортных систем служит средством сообщения между кровью и мозгом. ГЭБ образован клетками (эндотелиоцитами, перицитами), окончаниями астроцитов, образующими своеобразную периваскулярную «муфту», и неклеточной структурой (базальной мембраной). ГЭБ является динамичной структурой с насыщенной сигнальной функцией, играющей важную роль как в физиологических, так и патологических условиях.
Изменения ГЭБ являются компонентами практически всех нейродегенеративных заболеваний [Carvey P.M. et al., 2009]. При моделировании болезней, таких как реперфузионная травма и инсульт, наблюдается двухфазное открытие ГЭБ, в котором первая фаза является следствием активации металлопротеазы-2 (ММР-2), а поздняя обеспечивается активацией ММР-9 и ММР-3 [Rosenberg G.A., 2002; Gasche Y. et al., 2006].