Влияние продуктов разрушения Streptococcus Pyogenes на функции мононуклеарных фагоцитов, определяющие их способность к миграции из кровяного русла в очаг инфекции

• Автор: Лебедева, Александра Михайловна
• Шифр специальности: 03.03.04, 14.03.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 114 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Взаимодействие моноцитов крови с эндотелиальными клетками сосудов

1.1.1. Морфологические характеристики взаимодействующих клеток

1.1.2. Этапы мобилизации моноцитов из кровяного русла в очаг инфекции

1.1.3. Секреторная активность моноцитов крови человека

1.2. Влияние Streptococcus pyogenes и его компонентов на процессы мобилизации моноцитов в очаг воспаления

1.2.1. Факторы патогенности (вирулентности) гноеродного стрептококка

1.2.2. Влияние бактериальных компонентов на функции моноцитов крови
1.2.3. Влияние бактериальных компонентов на функции эндотелиальных клеток
1.3. Влияние компонентов гноеродного стрептококка на регуляцию взаимодействия
моноцитов крови с эндотелиальными клетками сосудов
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Культуры клеток
2.2. Выделение мононуклеарных лейкоцитов из периферической крови доноров
2.4. Характеристика супернатанта разрушенных У. pyogenes
2.5. Оценка интенсивности апоптоза и некроза в исследуемых культурах
2.6. Оценка адгезионной активности моноцитов крови человека и клеток линии ТНР-1..
2.6.1. Оценка адгезионной активности клеток линии ТНР-1 к монослою эндотелиальных клеток
2.6.2. Оценка адгезионной активности моноцитов крови к монослою эндотелиальных клеток
2.6.3. Оценка адгезионной активности мононуклеарных лейкоцитов крови к пластику
2.7. Оценка миграционной активности моноцитов крови и клеток линии ТНР-
2.7.1. Оценка миграционной активности клеток линии ТНР-
2.7.2. Оценка миграционной активности моноцитов крови человека
2.8. Исследование уровней экспрессии адгезионных молекул
2.9. Количественная оценка цитокинов в супернатантах
2.10. Исследование уровней экспрессии фосфокиназ

2.11. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на функции клеток линии ТНР-
3.1.1. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на адгезию клеток линии ТНР-1 к монослою эндотелиальных клеток
3.1.2. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на трансэндотелиальную миграцию клеток линии ТНР-
3.1.3. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на миграционную активность клеток линии ТНР-
3.1.4. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на уровень экспрессии адгезионных молекул на клетках линии ТНР-
3.1.5. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на уровень экспрессии фосфо-ЫЕкВ в клетках линии ТНР-
3.1.6. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на адгезию клеток линии ТНР-1 (интактных и проинкубированных с токсином коклюша} к эндотелиальным клеткам
3.1.7. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на трансэндотелиальную миграцию интактных и преинкубированных с токсином коклюша клеток линии ТНР-
3.1.8. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на интенсивность миграции интактных и преинкубированных с токсином коклюша клеток линии ТНР-
3.2. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на функции моноцитов периферической крови человека
3.2.1. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на адгезию моноцитов крови человека к монослшо эндотелиальных клеток
3.2.2. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на адгезию мононуклеарных лейкоцитов крови человека к пластику
3.2.3. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на трансэндотелиальную миграцию моноцитов крови человека
3.2.4. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на миграцию моноцитов крови человека
3.2.5. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на миграцию интактных и преинкубированных с токсином коклюша моноцитов крови человека

3.2.6. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на уровень экспрессии адгезионных молекул на моноцитах крови человека
3.2.7. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на секрецию цитокинов мононуклеарными лейкоцитами
3.2.8. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на уровень экспрессии
фосфокиназ моноцитами крови человека
3.3. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на функции эндотелиальных клеток
3.3.1. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на уровень экспрессии адгезионных молекул на поверхности эндотелиальных клеток
3.3.2. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на уровень экспрессии фосфо-ИЕкВ в эндотелиальных клетках
3.4. Исследование токсического эффекта супернатанта разрушенных стрептококков на мононуклеарные лейкоциты крови человека и клетки перевиваемых линий ТНР-1 и ЕА.Ьу

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на функции клеток линии ТНР-
4.2. Влияние супернатанта разрушенных стрептококков на функции моноцитов крови человека
Заключение
ВЫВОДЫ
Список используемой литературы

воспалительными реакциями. При инвазивной стрептококковой инфекции резко возрастает уровень цитокинов в крови. Усиленная секреция провоспалительных цитокинов способствует амплификации воспалительной реакции и приводит к массивным повреждениям тканей. Нарушения микроциркуляции, гипотензия, шок, полиорганная недостаточность, сопровождающие стрептококковую инфекцию, связаны в первую очередь с эндотелиальной дисфункцией (Tart et al., 2007; Sahni 2007; Pählman et al. 2006; Pählman et al. 2007).
М-белок S. pyogenes индуцирует продукцию гепарин-свнзывающего белка, который индуцирует синдром «протекания сосудов» (Tart et al., 2007; Pählman et al. 2006; Pählman et al. 2007). Гиперпроницаемость эпителия и эндотелия, нарушение эпителиального и эндотелиального барьеров связывают также с усилением апоптоза и некроза эндотелиальных клеток (Lucas et al. 2009). В норме процесс апоптоза позволяет организму избавляться от инфицированных клеток и удалять потенциальные мишени для адгезии и интернализации патогена. В то же время, способность индуцировать апоптоз позволяет бактерии избежать фагоцитоза, что способствует более глубокому проникновению и распространению инфекции. GAS индуцируют апоптоз различных типов иммунных клеток, активируя оба пути (митохондриальный путь или через рецепторы на поверхности клетки) (Lucas etal. 2009).
Многие эффекты стрептококков опосредованы TLR. Эндотелиальные клетки преимущественно микрососудов экспрессируют практически все известные TLR, за исключением TLR7, TLR8, TLR11 (Dunzendorfer et al., 2004; Danese et al., 2010). PGN и LTA, распознаваемые TLR2, индуцируют воспалительный ответ: активируется продукция провоспалительных цитокинов (TNF, 1L-6, IL-1) и сигналит' через MAP-киназу JNK и NFkB. Результатом становится TLR-опосредованный апоптоз инфицированных клеток (Santos-Sierra et al., 2006). При инфицировании HUVEC (эндотелиальные клетки пупочной вены человека) стрептококками (S', viridans, S. gordonii) инвазия бактерий в клетки сопровождается гибелью эндотелиальных клеток.
АТР, секретируемая GAS в повышенных концентрациях, регулирует сосудистый тонус (Schwiebert et al., 2002), повышает миграционную активность и индуцирует ангиогенез на «vasa vasorum» ЭК (Gerasimovskaya et al., 2008). При увеличении локальных концентраций адеиозина и адениновых нуклеотидов (например, при повреждении клеток или ишемии), происходит повышение проницаемости кровеносных сосудов (Frantz et al. 2005).
Глицеральдегид-З-фосфатдегидрогеназа GAPDH (не связанный с мембраной клеток фермент стрептококков) функционирует как комплекс по продукции АТР. АТР в