Кальциевые каналы TRPV5 и TRPV6 в лимфоцитах человека : идентификация и механизмы регуляции

• Автор: Томилин, Виктор Николаевич
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 104 с. : ил.

Оглавление
1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Роль кальция в жизнеобеспечении и активации лимфоцитов

2.2. Кальциевые каналы в лимфоцитах

2.3. Каналы суперсемейства ТИР

2.3.1. Подсемейство ТЛРС

2.3.2. Подсемейство ТЕРМ

2.3.3. Подсемейство ТИРМЬ

2.3.4. Подсемейства ТКРА и ТЯРР

2.3.5. Подсемейство ТИРУ
2.4. Роль ТИРУй в канцерогенезе
2.5. ТИР как каналы кальциевого входа
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Клетки
3.2. Регистрация ионных токов
3.3. Растворы
3.4. Антитела
3.5. Иммунофлуоресцентное окрашивание
3.6. Анализ и обработка изображений
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Исследование кальциевых каналов в клетках крови
4.1.1. Развитие интегральной активности моновалентных токов в клетках Тигкчй
4.1.2. Активность одиночных каналов в плазматической мембране клеток Лика!
4.1.3. Кальций-зависимая инактивация моновалетных токов
4.1.4. Блокирование кальциевых каналов в клетках .Гигка! рутениевым красным
4.1.5. Экспрессия каналов ТКРУ5 и ТЛРУб в клетках 1игка1
4.1.6. Активность кальций проводящих каналов в плазматической мембране лимфоцитов человека
4.1.7. Чувствительность кальциевых каналов к ЛиБ в лимфоцитах

4.1.8. периферической крови человека Экспрессия каналов ТИРУ 5 и ТИРУ6 в нормальных
4.1.9. лимфоцитах человека Структурные особенности каналов ТКРУ5 и ТЛРУб
4.2. Регуляция активности каналов Т11РУ5/У6 в клетках
4.2.1. Литка! pH регулирует активность каналов Т11РУ5/У6
4.2.2. Действие дайнасора, на активность каналов ТЯРУ5/У6
4.2.3. Колокализация клатрина с каналами ТПРУ 5 и ТІІРУб
4.2.4. Колокализация белка ЕЕА1 с каналами ТЯРУ5 и ТЛРУб
5. ОБСУЖДЕНИЕ
5.1. Молекулярная идентификация кальциевых каналов в
5.2. лимфоцитах человека Механизмы регуляции активности каналов ГКРУ5/У6 в
6. клетках Іигкаї ВЫВОДЫ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
TRP - transient receptor potential
RuR - рутениевый красный
IL-2 - интерлейкин-
TCR- Т-клеточный рецептор
PIP2 - фосфатидилинозитол-4,5-бифосфат
ІРз - инозитол-1,4,5-трифосфат
SOC - депо-управляемый Са2*-канал
CRAC - Са2+ release-activated Са2+ channel
АРС - антиген презентирующая клетка
ДК - дендритная клетка
МНС - главный комплекс гистосовместимости
ИС - иммунологический синапс
cADPR - циклическая-АДФ-рибоза
RyR - рианодиновый рецептор
PTKs - тирозинкиназы
NF-kB - универсальный транскрипционный фактор кВ
INF-y - интерферон - у
ALG-2 - гликозилтрансфераза
VDR - рецептор витамина D
l,25fOH]2Di - дигидрокси витамин ДЗ
РТН - паратиреоидный гормон
NCX1 — натрий кальциевый обменник

Каналы ТКРУЗ и ТКРУ4.
Экспрессия каналов ТЯРУЗ была показана в тканях мозга, языке и семенниках [88]. Уровень экспрессии также высок в клетках кожи, кератиноцитах и клетках, окружающих волосяные фолликулы. ТЛРУЗ активируется при температурах >30-33°С. Мыши с нокаутом по ТКРУЗ, демонстрировали значительное снижение чувствительность к тепловому стрессу, тогда как другие сенсорные функции оставались в порядке [89].
Каналы ТКРУ4 экспрессируются в костной ткани, хондроцитах, инсулин-производящих р-клетках, кератиноцитах, клетках гладкой мускулатуры, и в различных эпителиальных клетках [82]. ТКРУ4 активируется при довольно низкой температуре (>24°С), поэтому является конститутивно активным при нормальной температуре тела. Другими известными активаторами канала являются механическое воздействие, анандамид и арахидоновая кислота [90]. Считается, что ТКРУ4 принимает участие в терморегуляции эпидермальных кератиноцитов. В нейронах ТКРУ4 работает как рецептор, активируемый механическим и осмотическим стрессом. Недавно обнаруженная экспрессия ТЯРУ4 в остеобластах и остеокластах может свидетельствовать об участии этого канала в формировании костной ткани [91].
Каналы ТКРУ5 и ТКРУ6.
Каналы ТИРУ 5 и ТЯРУб были идентифицированы в результате поиска генов, ответственных за трансклеточный транспорт Са2+ в почках [92] и кишечнике [93]. До конца двадцатого века кальбидины считались основными молекулами трансклеточного кальциевого транспорта, и лишь немного было известно о механизме входа кальция через апикальную мембрану. Используя мРНК, выделенную из клеток соединительных трубочек и клеток кортикальных собирательных трубочек, полученных из почки кролика, Бинделс и его группа [92] создали библиотеку кДНК и определили нужный