Дистанционные взаимодействия нейтрофилов человека с клетками и бактериями, опосредованные мембранными тубуловезикулярными секреторными структурами : цитонемами

• Автор: Галкина, Светлана Ивановна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 195 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Введение

2. Строение и функции нейтрофилов

3. Фагоцитоз и уничтожение фагоцитированных бактерий 17 нейтрофилами

4. Гранулы и бактерицидные агенты нейтрофилов

5. Адгезионные рецепторы нейтрофилов и регуляция адгезии 23 нейтрофилов к стенкам сосудов
6. Вытягивание мембранных цилиндров из тела нейтрофилов и их 26 слущивание под действием потока.
7. Вытягивание мембранных цилиндров из тела нейтрофилов под 28 действием локально приложенной силы
8. «Экстраклеточные уздечки» нейтрофилов
9. Микровезикулы и эктосомы, секретируемые нейтрофилами
10.Адгезионные взаимодействия клеток и внутриклеточный pH
11 .Образование цитонем в эмбриональных клетках, клетках кровн и
других клетках эукариот
12.Роль метаболизма глюкозы и АТФаз вакуолярного типа в 39 процессах слияния/разделения клеточных мембран
13.Роль актинового цитоскелета в образовании цитонем в 44 нейтрофилах человека и в других клетках
14.Окись азота как физиологический регулятор образования
цитонем в нейтрофилах
15.Синтез N0 как точка приложения факторов, ответственных за 51 тубуляцию/везикуляцию мембран
16.Паразитические простейшие индуцируют образование в 52 нейтрофилах тубулярных филоподий, способных связывать паразитов
17.Цитонемы паразитических простейших
18.Перспективы дальнейшего изучения цитонем
19.Цитонемы бактерий
20.Мембранные тубовезикулярные структуры, создаваемые 57 бактериями или паразитическими простейшими внутри клетки хозяина
21.Перспективы дальнейшего изучения цитонем '
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Материалы
2. Клетки
3. Бактерии

4. Адгезия нейтрофилов к субстрату
5. Количественная оценка числа прикрепившихся нейтрофилов
6. Определение рецепторов, вовлеченных в адгезию нейтрофилов
7. Измерение степени распластывания клеток
8. Оценка жизнеспособности нейтрофилов
9. Измерение внутриклеточного pH
Ю.Взаимодействие нейтрофилов с бактериями
11 .Опсонизация зимозана и бактерий
12.Флуоресцентная микроскопия
13.Сканирующая электронная микроскопия
14.Трансмиссионная электронная микроскопия
15.Определение белкового состава цитонем
16.Концентрирование белков
17.Электрофорез белков в полиакриламидном геле
18.Триптический гидролиз белка в полиакриламидном геле
19.Подготовка образцов для масс-спектрометрии
20.Получение масс-спектров
21 .Идентификация белков по «пептидному фингерпринту»
22.Хроматография высокого разрешения
23.Масс-спектрометрическое определение дефензинов
24.Определение бактерицидной активности продуктов,
содержащихся в цитонемах 25.Статистическая обработка результатов
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Влияние окиси азота, супероксиданионрадикалов и 75 пероксинитрита на адгезию нейтрофилов человека к монослою клеток эндотелия человека
2. Изучение механизмов адгезии нейтрофилов человека к твердому 82 субстрату, покрытому белками экстраклеточного матрикса
3. Влияние межклеточной адгезии нейтрофилов и фибробластов 86 человека на величину внутриклеточного pH клеток
4. Выявление метаболических процессов, регулирующих 98 внутриклеточный pH и образование цитонем при адгезии нейтрофилов к фибронектину
5. Выявление ионообменных процессов, контролирующих 107 внутриклеточный pH и морфологию нейтрофилов при адгезии к фибронектину
6. Роль деполимеризации актинового цитоскелета в образовании 118 мембранных тубуловезикулярных структур нейтрофилов
7. Роль N0 в адгезионных взаимодействия нейтрофилов с клетками, 127 дрожжами и бактериями
8. Изучение механизма связывания бактерий цитонемами 138 нейтрофилов человека
9. Протеомный анализ состава цитонем

10.Доказательство мембранной природы тубулярных структур,
связывающих бактерии с клетками эукариот и с другими бактериями в биопленках 11 .ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
12.ВЫВОДЫ
13.СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

хлоридом. Удаление ионов Na+ из экстраклеточной среды наряду с полным подавлением распластывания нейтрофилов вызывало образование и рост цитонем на поверхности клеток.
Дальнейшие исследования показали, что величина pHi фибробластов и нейтрофилов, прикрепленных к твердому субстрату, зависела не только и не столько от степени распластывания клеток на поверхности, но от клеточной плотности (Galkina et at., 1995; Galkina et al., 2006; Galkina et al., 1992, 1996; Sud'ina et al., 1998). Величина pHi единичных, хорошо распластанных клеток, была значительно меньше значений pHi менее распластанных клеток в середине монослоя, которые имели множественные контакты с соседними клетками. Таким образом, было показано, что адгезия клеток к твердым субстратам и окружающим клеткам приводит к существенным изменениям pHi и может через эти изменения влиять на активность внутриклеточных процессов. Мы также показали, что значение pHi прикрепленных к фибронектину нейтрофилов регулируются протеинкиназой С. Ингибиторы протеинкиназы С стауроспорин и Н-7 повышают pHi до максимальных значений, независимо от плотности клеток, в то время как активатор протеинкиназы С форболовый эфир снижает pHi. При этом и ингибиторы и активатор протеиназы С мало влияют на степень распластывания клеток. Агенты, повышающие внутриклеточную концентрацию сАМФ, также способствуют повышению pH до максимальных значений.
Образование цитонем в эмбриональных клетках, клетках крови и других клетках эукариот
Впервые структуры аналогичные цитонемам нейтрофилов наблюдались в эмбриональных клеток морского ежа при гаструляции (Gustafson and Wolpert, 1967). Гаструляция у морского ежа начинается с