Состав и свойства тонких нитей запирательных мышц мидии Crenomytilus Grayanus

• Автор: Добржанская, Анна Валерьевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Владивосток
• Количество страниц: 103 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Гладкие (запирательные) мышцы моллюсков
1.1.1. Структурно-функциональные особенности мышц двустворчатых
моллюсков
1.1.2. Толстые нити запирательных мышц моллюсков
1.1.3. Тонкие нити запирательных мышц моллюсков
1.2. Особенности Са24 -регуляции сокращения мышц двустворчатых
моллюсков
1.2.1. Миозиновый тип Са2+-регуляции
1.2.2. Актиновый тип Са2+-регуляции
1.3. Запирательное сокращение гладких мышц двустворчатых
моллюсков
1.3.1. «Мостиковая» («миозиновая») гипотеза
1.3.2. «Твитчиновая» гипотеза
1.3.3. Возможное участие миорода в запирательном сокращении
1.4. Белки кальпонинового семейства
1.4.1. Кальпонин гладких мышц позвоночных
1.4.2. Кальпонин немышечных клеткок
1.4.3. Кальпонин беспозвоночных животных
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Выделение сократительных белков из гладких мышц моллюсков
2.2. Выделение сократительных белков из скелетных мышц кролика
2.3. Получение термостабильных белков из гладких мышц цыплёнка и мидии

2.4. ДСН-электрофорез в полиакриламидном геле
2.5. Белковый иммуноблот

2.6. Измерение АТФазной активности
2.7. Матричная лазерная десорбционно-ионизационная времяпролетная
тандемная масс-спектрометрия (МАИЛ/МБ-МБ)
2.8. Низкоскоростное и высокоскоростное осаждение белковых комплексов
2.9. Денситометрия
2.10. Теневые мышечные волокна
2.11. Измерение вязкости
2.12. Вспомогательные методы
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Выделение и состав тонких нитей запирательных мышц мидии
3.2. Активирование тонкими нитями мидии М§-АТФазной активности миозина
кролика
3.3. Идентификация кальпониноподобного белка в составе тонких нитей
мидии
3.4. Поиск кальдесмоноподобного белка в гладких мышцах мидии
3.5. Свойства кальпонина гладких мышц мидии
3.5.1. Влияние кальпонина мидии на Mg-ATФaзнyю активность актомиозина
3.5.2. Взаимодействие кальпонина мидии с актином
3.5.3. Кальпонин мидии и Са2 - регуляция тонких нитей мидии
3.5.4. Влияние кальпонина мидии на гидролиз АТФ в теневых мышечных волокнах
3.5.5. Влияние кальпонина мидии на взаимодействие актиновых нитей
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Тонкие нити гладких мышц мидии
4.1.1. Выделение тонких нитей мидии
4.1.2. Белковый состав тонких нитей мидии
4.2. Идентификация кальпонина в гладких мышцах мидии

4.3 Попытка идентификации кальдесмона в гладких мышцах
мидии
4.4 Свойства кальпонина мидии
4.5 Са24-чувствительность тонких нитей мидии
4.6 Возможная функция кальпонина в запирательных мышцах
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. (МгЦЬМси - 2.5% раствор молибденовокислого аммония;
2. НгБСД - 5И раствор;
3. Молибденовый реактив — смесь равных объёмов молибденовокислого аммония (1) и серной кислоты (2);
4. Эйконоген (а-1,2,4-аминонафтолсульфоновая кислота).
Формирование белковых комплексов проводили при 4°С. Конечный объём
белковых смесей составлял 2.7 мл. Перед запуском АТФазной реакции, пробирки с белковыми комплексами инкубировали при температуре 25°С в течение 10 минут. После остановки АТФазной реакции добавлением 270 мкл 50%-ной ТХУ, денатурированные белки удаляли центрифугированием при 5 ООО g в течение 20 минут. К 2 мл супернатантов добавляли 232.6 мкл молибденового реактива и 93 мкл основного раствора эйконогена. Пробы инкубировали 20 мин при комнатной температуре и измеряли оптическую плотность при длине волны 625 нм. Количество неорганического фосфата и АТФазную активность рассчитывали по формулам:
[Р;] = 0.352 хЕ625 (1)
где [Р|], количество неорганического фосфата;
АА= [Р,] / (^реакции X [Мп] = МКМОЛЬ Р/мГ Мп/мИН, (2)
где АА, АТФазная активность, Мп, концентрация миозина.
Величина Са2+-чувствительности (%) вычислялась по формуле:
[1-АА (-Са2+)/АА (+Са2+)]х 100, (3)
где АА (-Са2+), АТФазная активность ЭГТА среде, АА (+Са2+), АТФазная активность в Са2+ среде.
2.7. Матричная лазерная десорбционно-ионизационная времяпролетная тандемная масс-спектрометрия (МА1ЛМ/М8-М8)
В качестве материала для масс-спектрометрии использовались белковые зоны после ДСН-электрофореза. Белковые зоны с молекулярным весом 40 и 34 кДа в составе препаратов тонких нитей мидии были вырезаны и переданы для проведения масс-спектрометрии в НИИ Физико-химической медицины Росздрава.