Роль Fcγ-рецепторов в реализации биологического действия C-реактивного белка на иммунокомпетентные клетки

• Автор: Трулёв, Андрей Сергеевич
• Шифр специальности: 03.03.04, 14.03.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 141 с. : ил.

Содержание

Список использованных сокращений

Введение

1. Литературный обзор

1.1. Тучные клетки

1.1.1. Общая информация

1.1.2. Роль тучных клеток в защите организма

1.1.3.Взаимодействие тучных клеток с матриксом соединительной ткани

1.1 АВзаимодействие тучных клеток с фибробластами

1.2. Пентраксины: структура — свойства, лиганды, роль в защите организма

1.2.1. С-реактивный белок

1.2.2. Рецепторы для С-реактивного белка
1.3. Рсу-рецепторы
1.3.1. Структура, классы, распространение на клетках, функции
1.3.2. Рсу-рецепторы на тучных клетках
2. Материалы и методы
2.1 Культуры клеток
2.1.1. Тучные клетки линии НМС-
2.1.2. Фибробласты человека
2.1.3. Клетки линии ТНР-
2.1.4. Клеточная линия и-
2.1.5. Клеточная линия ЕА.йу
2.1.6. Клеточная линия СОЬО320Н8Р
2.2. Приготовление и окраска мазков клеток
2.3. Оценка токсического эффекта исследуемых препаратов на клетки ТНР-1, И-937 и НМС-
2.4. Проточная цитометрия
2.5. Оценка активации тучных клеток линии НМС-
2.5.1. Стимуляция тучных клеток

2.5.2. Оценка активации по экспрессии на клетках молекул СБ63 и СБ203с
2.5.3. Оценка активации по выходу гистамина из тучных клеток, методом Шора
2.6. Оценка адгезии клеток друг к другу
2.6.1. Оценка адгезии при помощи спектрофлюориметра
2.6.2. Оценка адгезии клеток при помощи методов проточной цитометрии
2.6.3. Оценка адгезии клеток 01-937 по активности миелопероксидазы
2.7. Связывание С-реактивного белка с клетками
2.7.1. Мечение С-реактивного белка биотином
2.7.2. Связывание С-реактивного белка с клетками эндотелия линии ЕА.йу
2.7.3. Связывание С-реактивного белка с тучными клетками линии НМС-1
2.8. Трансфекция
2.8.1. Выделение плазмидной ДНК
2.8.2. Трансфекция клеток
2.9. Статистическая обработка
3. Результаты
3.1. Исследование токсического эффекта различных доз препаратов С-реактивного белка и агрегированного человека на клетки
перевиваемых линий ТНР-1, ЕГ-937 и НМС-
3.2. Экспрессия Рсу-рецепторов на клетках исследуемых линий
3.2.1. Экспрессия Рсу-рецепторов на фибробластах
3.2.2. Экспрессия Рсу-рецепторов на клетках линии СОЬО320Н
3.2.3. Экспрессия Рсу-рецепторов на эндотелиальных клетках линии ЕА.Ьу
3.2.4. Экспрессия Рсу-рецепторов на моноцитоподобных клетках линий ТНР-1 и и-
3.2.5. Экспрессия Рсу-рецепторов на тучных клетках линии НМС-

3.2.5.1. Влияние IFNy на экспрессию Fcy-рецепторов тучными клетками линии НМС-
3.3.Связывание С-реактивного белка с клетками
3.3.1. Связывание С-реактивного белка с эндотелиальными клетками линии EA.hy
3.3.2. вязывание С-реактивного белка с тучными клетками линии НМС-1
3.4. Влияние С-реактивного белка на дегрануляцию тучных клеток линии НМС-
3.5. Влияние лигандов Fcy-рецепторов (С-реактивного белка, агрегированного IgG) на адгезивность клеток
3.5.1. Влияние С-реактивного белка и агрегированного IgG на адгезивные свойства тучных клеток линии НМС-
3.5.2. Влияние С-реактивного белка на адгезивность фибробластов для тучных клеток линии НМС-1 и моноцитов линии ТНР-
3.5.3. Влияние С-реактивного белка на адгезию тучных клеток линии НМС-1 к фибробластам в его присутствии
3.5.4. Влияние С-реактивного белка на адгезивность эндотелиальных клеток линии EA.hy926 для тучных клеток линии НМС-
3.5.5. Влияние С-реактивного белка на адгезивность эндотелиальных клеток линии EA.hy926 для моноцитов линии ТНР-
3.5.6. Влияние С-реактивного белка на адгезивность моноцитов линии ТНР-1 к эндотелиальным клеткам линии EA.hy926 в присутствии С-реактивного белка
3.5.7. Влияние С-реактивного белка на адгезию моноцитов линии U-937 к
фибробластам
3.6. Влияние С-реактивного белка на активацию транскрипционного фактора NF-kB
3.6.1. Влияние С-реактивного белка на активацию NF-kB в тучных клетках линии НМС-
3.6.2. Влияние С-реактивного белка на активацию NFkB в клетках

фагоцитозу, дегрануляции и активации клеток, вовлеченных в воспалительный ответ (Gessner et al., 1998).
Описано три разных типа Fcy-рецепторов. Человеческий высокоаффинный Fcy-рецептор I типа (FcyRI, или CD64) представляет собой гликопротеин с массой 72 кД. Описаны подклассы А, В и С, причем только FcyRIA является высокоаффинным, тогда как FcyRIB и FcyRIC имеют стоп-кодоны в рамке считывания, и синтез их третьего внеклеточного домена, обеспечивающего высокий аффинитет, прерывается (Emst et al., 2001). FcyRI обладает высокой аффинностью благодаря наличию третьего внеклеточного домена, который отсутствует у рецепторов второго и третьего типов. FcyRI способен связывать как мономерный, так и агрегированный IgG, причем предпочтительно IgGl или IgG3, тогда как взаимодействие с IgG подклассов IgG2 и IgG4 слабее. Данный рецептор конститутивно экспрессирован на моноцитах и макрофагах. Под действием IFNy, IL-10 и G-CSF нейтрофилы, эозинофилы и мезангиальные клетки также начинают его экспрессировать. Индукция синтеза FcyRI в местах воспаления может быть важна для запуска антителозависимой клеточной цитотоксичности и фагоцитоза, что приводит к усилению презентации антигенов (Gessner et al., 1998).
Fcy-рецептор II типа (FcyRII, или CD32) является гликопротеином с молекулярной массой 40 кД, который связывает антитела класса IgG в составе иммунных комплексов с аффинностью ниже, чем FcyRI. Описаны подтипы этого рецептора FcyRIIA, FcyRIIB и FcyRIIC. FcyRIIA и FcyRIIC несут на себе внутриклеточный ITAM-домен и, следовательно, являются рецепторами активирующего типа, тогда как рецептор FcyRIIB обладает ингибирующим ITIM-доменом. Так же, как и CD64, данный рецептор предпочтительно взаимодействует с подклассами IgGl и IgG3. Он экспрессирован на всех лейкоцитах крови млекопитающих. Такие клетки, как В-лимфоциты, часть Т-клеток, моноциты и макрофаги, все гранулоциты, а также кровяные пластинки, клетки Лангерганса и эндотелий несут на себе CD32. В отличие от Fcy-рецепторов I и III типов, экспрессия FcyRII на нейтрофилах и клетках моноцитарно-макрофагального ряда не зависит от стимуляции цитокинами, они