Структурно-функциональная организация хромосом описторхид

• Автор: Задесенец, Кира Сергеевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 169 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. СЕМЕЙСТВО OP1STHORCHIIDAE (PLATYHELMINTHES, TREMATODA)

7.7 Систематическое положение исследованных видов описторхид

1.1.1 Подсемейство Opisthorchiinae Looss, 1899

1.1.2 Подсемейство Metorchiinae Liihe, 1909

7.2. Географическое распространение видов, вовлеченных в исследование

1.3.1 Яйцо
1.3.2 Мирацидий
1.3.4 Церкария
1.3.5 Метацеркария
1.3.6 Марита
7.5. Культивирование трематод
1.6Хромосомы описторхид
1.6.1 Методы приготовления хромосомных препаратов описторхид
1.6.1.1. Приготовление препаратов метафазных хромосом из соматических клеток
1.6.2. Методы дифференциального окрашивания хромосом трематод
1.6.2.1. С-дифференциальное окрашивание хромосом
1.6.2.2 Окрашивание азотнокислым серебром (AgNOR-бэндинг)
1.6.3 Гибридизация нуклеиновых кислот in situ
1.6.3.1 ДНК-пробы, специфичные повторенным последовательностям
1.6.3.2 Хромосомоспецифичные ДНК-пробы
1.6.3.3 Физическое картирование хромосом трематод с помощью FISH
7.7 Кариотипы трематод
1.7.1 Число хромосом и плоидность генома трематод
1.7.2 Определение пола у трематод
1.7.3 В-хромосомы
Заключение

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Материалы
2.1 Л Реактивы
2.1.2 Ферменты и коныогаты
2.1.3 Растворы и буферы
2.1.4 Мариты описторхид
2.2 Методы
2.2.1 Подготовка препаратов для световой микроскопии
2.2.1.1 Фиксация и заключение образцов марит в парафин, криогель, желатин
Фиксация и заключение образцов марит в парафин
Фиксация и заключение материала в криогель О. С. Т. (Optimal Cutting
Temperature compound)
Заключение материала в желатин
Приготовление срезов марит, заключенных в парафин
Приготовление криосрезов марит
2.2.1.3 Окрашивание живых марит описторха
2.2.2 Гистологическое и гистохимическое окрашивание срезов
2.2.2.1 Окрашивание по Маллори
2.22.2 Окрашивание по ван Гизону
2.2.2.3 Окрашивание по Хейлу
2.2.2.4 Окрашивание толуидиновым синим
2.2.2.5 Окрашивание кармином по методу Беста
2.2.2.6 Окрашивание гематоксилин-эозином
2.22.1 Окрашивание железным гематоксилином
22.2.9 Окрашивание Суданом (III)
2.2.2.10 Окрашивание альциановым синим
2.2.3 Приготовление образцов марит к лазерной сканирующей микроскопии
2.2.5 Приготовление препаратов митотических и мейотических хромосом описторхид
2.2.6 Приготовление препаратов хромосом для проведения микродиссекции
2.2.7 Проведение дифференциального окрашивания хромосом
2.2.7.1 С-дифференциальное окрашивание хромосом

22.1.2 Дифференциальное окрашивание ЯО районов (AgNOR-бэндинг)
2.2.13 DAPI-дифференциальное окрашивание хромосом
2.2.8 Приготовление микропипеток для проведения микродиссекции
2.2.9 Приготовление игл для проведения микродиссекции
2.2.10 Микродиссекция мейотических и митотических хромосом
2.2.11 Амплификация ДНК диссектированного материала в ПЦР с частично вырожденным праймером (DOP-PCR - Degenerate Oligonucleotide Primed Polymerase Chain Reaction)
2.2.12 Создание ДНК-проб, специфичных 18 S, 5,8 S рДНК, и теломерных ДНК-
проб
2.2.13 Мечение ДНК в дополнительных циклах DOP-PCR
2.2.14 Флуоресцентная гибридизация in situ
2.2.15 Микроскопический анализ препаратов хромосом
2.2.16 Морфометрия хромосом
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1 Комплексный микроскопический анализ мариты
кошачьей двуустки O.felineus
3.2 Хромосомы описторхид
3.2.1 Кариотип O.felineus
3.2.2 Кариотип О. viverrini
3.2.3 Кариотип М. xanthosomus
3.2.4 Кариотип М. bilis
3.2.5 Кариотип С. sinensis
3.2.6. Сравнительный анализ хромосом описторхид, окрашенных с помощью DAPI-дифференциального окрашивания
3.2.7 С-окрашивание хромосом описторхид
3.2.8 Выявление активных ЯО районов в хромосомах описторхид
3.2.9 Определение локализации кластера рДНК с помощью гибридизации in situ
3.2.10 Определение локализации теломерной ДНК с мотивом TTAGGG с помощью гибридизации in situ
3.2.11 FISH микродиссекционных ДНК-проб, специфичных хромосомам 1 и
описторхид (O.felineus и М. xanthosomus) с их хромосомами

парные, округлой формы, лопастные или ветвящиеся, располагаются в задней трети тела мариты описторхид: наискось или на одном уровне. Отличительной чертой описторхид является отсутствие цирруса (совокупительного органа). Дистальная часть семенного протока заканчивается формированием тонкостенного, чаще трубчатого по форме семенного пузырька, который, извиваясь или скручиваясь, открывается в генитальную пору в обычно небольшом половом отверстии впереди от брюшной присоски (Филимонова, 2000).
Яичник, компактный или лопастной, лежит впереди семенников; имеется Лаурсров канал. Семяприемник обычно хорошо развит. Желточники (вителлиновые железы) располагаются по бокам кишечника и могут частично перекрывать его (Скрябин, 1950).
Ниже приведены отличительные морфологические признаки, лежащие в основе классификации описторхид.
О. felineus Rivolta
Тело мариты имеет ланцетовидную форму, передний конец которого сужен, задний закруглен. Размеры тела значительно зависят как от вида дефинитивного хозяина, так и от степени инвазии: длина тела 8-13 мм, ширина 1,2-3,5 мм. Яичник цельнокрайний, реже слаболопастной, расположен впереди переднего семенника, почти в средней части тела. Матка простирается от яичника до переднего края брюшной присоски, но не заходит за нее. Желточники собраны в гроздья и расположены в средней трети тела позади брюшной присоски. Семенники 4-5-лопастные, лежат наискось. Впереди семенников располагается крупный семяприемник. Половые отверстия открываются у переднего края брюшной присоски. Выделительный канал (основная часть) S-образной формы, проходит между семенниками. Размер яиц: (0,026-0,030) х (0,010-0,015) мм.
О. viverrini Poirier
Форма тела мариты ланцетовидная, передний конец которого сужен, задний конец закруглен. Размеры тела: (5,4-10,2) х (0,8-1,9) мм. Есть глотка, пищевод в три раза длиннее глотки. Семенники четырехлопастные, расположены в заднем конце тела. Яичник многолопастной. Семяприемник расположен латерально от яичника.