Пластинка контакта ооцита сцифомедузы Aurelia aurita: структурная организация и морфодинамика

• Автор: Адонин, Леонид Сергеевич
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 120 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Объект исследования
1.1. Кишечнополостные
1.2. Гены и белки
1.3. Размер генома и кариология
1.4. Жизненный цикл медузы Aurelia aurita
1.5. Мезоглея сцифомедузы Aurelia aurita
2. Мезоглеин - белок «эластических» волокон мезоглеи
3. ZP-доменные белки: строение, разнообразие и основные функции
3.1. Строение ZP-доменных белков
3.2. ZP-домен
3.3. Функции некоторых ZP-домен-содержащих белков
4. Синтез компонентов Zona Pellucida и её аналогов в животном царстве
4.1. Структура Zona Pellucida
5. Гаметогенез и оплодотворение у представителей
т. Cnidaria
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
1. Сбор материала
2. Получение метафазных пластинок
3. Окрашивание DAPI
4. Парафиновые срезы
5. Иммуногистохимия

6. Полутонкие срезы
7. Измерение
8. Ультратонкие срезы
9. Иммунологический метод окрашивания золотом (Immunogold)
10. In vitro оплодотворение
11. Электрофоретическое разделение белков в условиях SDS-электрофореза по Лэммли
12. Электрофоретическое разделение белков в условиях кислого электрофореза по Чокли
13. Иммуноблот (Вестернблот)
14. Выделение РНК
15. Обратная транскрипция
16. RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends) ПЦР
17. Компьютерные методы анализа 65 РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Кариологический анализ Aurelia aurita и Aurelia spl из акваторий Белого и Японского морей
2. Описание пластинки контакта на светооптическом
уровне. Гистохимический анализ
3. Непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание парафиновых срезов тканей гонад самок Aurelia aurita
4. Ультраструктурная организация пластинки контакта
5. Иммунологический метод окрашивания золотом (Immunogold)
6. ZP-доменные белки гонад и соматических клеток
7. ZP-домен есть в кДНК гонад
8. Клонирование части последовательности кДНК Gf
9. In vitro оплодотворение

10. Белки, родственные ZP-доменным белкам

Aurelia aurita, в компьютерных базах данных ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Кариологический анализ Aurelia aurita и Aurelia spl из акваторий Белого и Японского морей
2. Пластинка контакта в сравнении с Zona Pellucida
3. Двухслойная организация тела представителей Cnidaria 99 ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ

ZP2 (Roller et al., 1983; Jovine et al., 2002). О-олигосахариды других белков необходимы для выполнения иных биологических функций. Например, О-олигосахарид белка ZP3 выполняет рецепторную функцию связывания сперматозоида (Wassarman et al., 2001). Паттерн локализации сайтов N-гликозилирования на аминокислотной последовательности является консервативным для гомологичных ZP-домен-содержащих белков. В то же время, для представителей из разных подсемейств (ZPA, ZPB, ZPC и ZPX) это правило не соблюдается (Tarin & Cano, 2000).
Более того, некоторые ZP-доменные белки вовсе не имеют ни N-, ни О-олигосахаридов (например, VEa и VE|3, обнаруженные в яйцевой оболочке костистых рыб) (Brivio et al., 1991). Поэтому, хоть гликозилирование и является частой модификацией основных ZP-доменных белков, оно не абсолютно необходимо для всех представителей семейства.
ZP-доменные белки характеризуются высокомозаичным строением, в их состав может входить огромное количество структурнофункциональных доменов, находящихся между сигнальным N-пептидом и ZP-доменом, в разных комбинациях (Jovine, 2005). Также все предшественники ZP-доменных белков обычно в своем составе имеют участок гидрофобных аминокислот, который обеспечивает прикрепление полипептидов к мембране. Это является необходимым свойством? для транспортировки белков в секреторных везикулах к плазматической мембране клетки (Qi et al., 2002). Экзоцитоз белков во внеклеточный матрикс осуществляется после протеолитического расщепления по консервативным сайтам узнавания протеазы фурин, находящимся между ZP-доменом и С-концевым мембрано-связывающим мотивом (Cavallone et al., 2001; Qi et al., 2002; Litscher et al., 1999).
Известны ZP-доменные белки, например, эндоглин, у которых отсутствует сайт узнавания для протеазы, и они сохраняют постоянную