Динамика клеточных популяций гемоцитов асцидии Halocynthia Purpurea в ответ на тканевое повреждение

• Автор: Сухачев, Александр Николаевич
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 150 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Системное положение асцидий и их роль в эволюции иммунитета

1.2. История изучения циркулирующих клеток асцидий

1.3. Характеристика циркулирующих клеток различных популяций асцидии Н.purpurea

1.4. Типирования гемоцитов асцидий с использованием градиентов плотности и моноклональных антител

1.5. Регенерация и обновление клеток

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Сбор экспериментальных животных
2.2. Иммунологические реагенты
2.3. Получение гемолимфы
2.4. Подсчет числа гемоцитов в гемолитической жидкости
2.5. Культуральная среда
2.6. Фракционирование гемоцитов асцидии Halocynthia purpurea
2.7. Оценка кислородного метаболизма гемоцитов асцидии Halocynthia purpurea
2.8. Оценка влияния лектинов на способность гемоцитов поглощать нейтральный красный
2.9. Определение гемагглютинирующей активности гемолимфы
2.10. Исследование динамики клеточных популяций в ходе репаративных процессов
2.11. Оценка пролиферативной активности гемоцитов с помощью метода проточной цитометрии
2.12. Оценка связывания моноклональных антител к адгезионным молекулам человека с гемоцитами асцидий
2.13. Конфокальная микроскопия
2.14. Количественное определение цитокинов методом иммуноферментного анализа
2.15. Исследование морфологии гемоцитов с помощью световой микроскопии
2.16. Статистические методы
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Морфологическая характеристика гемоцитов асцидии Halocynthia purpurea
3.1.1. Изучение препаратов клеток гемолимфы асцидии Н.purpurea
3.1.2. Использование метода проточной цитометрии для типирования циркулирующих клеток асцидии Н.purpurea
3.1.3. Использование метода градиентного центрифугирования для типирования циркулирующих клеток асцидии Н.purpurea
3.2. Функциональная характеристика гемоцитов асцидии Halocynthia purpurea
3.2.1. Продукция активных форм кислорода
3.2.2. Оценка влияния лектинов растительного и животного происхождения на функциональную активность гемоцитов
3.3. Исследование динамики клеточных популяций асцидии в ответ на повреждения покровов
3.3.1. Изучение динамики клеточных популяций гемоцитов асцидии
H.purpurea с использованием метода проточной цитометрии
3.3.2. Изучение пролиферативной активности гемоцитов асцидии
H.purpurea в ответ на повреждение покровов
3.3.3. Оценка экспрессии поверхностных молекул гемоцитами асцидии
H.purpurea в норме и в ответ на повреждение покровов
3.4. Исследование функциональной активности гемоцитов асцидии
в ответ на повреждения покровов
3.4.1. Изучение продукции цитокино-подобных факторов

3.4.2. Изучение способности гемоцитов к синтезу активных форм кислорода в ответ на тканевое повреждение
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

к эндоцитозу и фагоцитозу (ХР_002123269). Обнаружен также ген ХР_002124817, имеющий высокую гомологию с геном CD36 - рецептора тромбоспондина - одного из самых мультифункциональных гликопротеинов, вовлеченных как в процессы формирования межклеточного матрикса, так и в процесс элиминации клеток, погибших путем апоптоза, за счет связывания молекул группы DAMP. Важной в этом смысле представляется и находка участка ДНК, гомологичного гену CD40, продукт которого относится к числу мембранных молекул семейства TNFa и играет ведущую роль в развитии иммунного ответа (ген по GenBank ХР_002121961), а также в индукции процесса апоптоза. Обнаружение гена ХР 002123541, имеющего гомологию с геном CD81, представляется несколько парадоксальным, ибо у млекопитающих этот маркер экспрессируется на развивающихся клетках красного костного мозга, участвует во внутриклеточном проведении сигнала, а также входит в состав В-клеточного рецепторного комплекса как ТАРА-1-антиген. Нельзя не обратить внимания на тот факт, что на В-клетках млекопитающих также выявляются как сам CD81, так и рецептор комплемента CD21, также входящий в состав В-клеточного рецепторного комплекса. Поэтому обнаружение в клетках асцидий гомолога другого рецептора комплемента (гомолог CD35), о чем упоминалось выше, может быть не случайным совпадением.
Из гомологов молекул, участвующих в проведении сигнала, в гемоцитах асцидий выявлено наличие генов ХР_002126191 (гомолог гена CD63), ХР_002120584, гомологичного гену CD98, непосредственно
участвующего в активации, и гомолога CD151 (ген ХР_002126833 по GenBank), также вовлеченного во внутриклеточный сигналинг и активацию клеток и экспрессируемого как на поверхности клеток так и во внутриклеточном пространстве. Из других генов представляются интересными находки гомологов генов CD202 (NP_001123204) -рецептора к тирозинкиназе, специфичного для клеток эндотелия, инсулинового рецептора