Применение мезенхимальных плюрипотентных стромальных клеток для коррекции венозного тромбоза в эксперименте

• Автор: Марчуков, Сергей Вадимович
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 134 с. : 40 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Оглавление
Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Существующие экспериментальные модели венозного тромбоза

1.2. Характеристика мезенхимальных мультипотентных стромальных клеток и их источники
1.3. Судьба введенных мезенхимальных мультипотентных стромальных клеток в организме

1.4. Ангиогенез в норме

1.5. Участие мезенхимальных мультипотентных стромальных

клеток костномозгового происхождения в ангиогенезе
1.6. Клеточные технологии в коррекции тромботических состояний
Глава 2. Материал и методы исследования
2.1. Группы животных и сроки забора материала
2.2. Выделение аутологичных мезенхимальных стволовых клеток
2.3. Моделирование венозного тромбоза и применение аутологичных мезенхимальных стволовых клеток
2.4. Объект исследования, подготовка материала к изучению, морфологические методы исследования, морфометрия
и статистическая обработка полученных данных
Глава 3. Результаты применения аутологичных мезенхимальных
стволовых клеток для коррекции венозного тромбоза
3.1. Состояние тканей региона v. femoralis у интактных животных
3.2. Состояние тканей региона v. femoralis
через 4 суток после моделирования тромбоза
3 .3. Состояние тканей региона v. femoralis
через 1 неделю после моделирования тромбоза

3.4. Состояние тканей региона v. femoralis
через 2 недели после моделирования тромбоза
3.5. Состояние тканей региона v. femoralis
через 3 недели после моделирования тромбоза
3.6. Состояние тканей региона v. femoralis
через 4 недели после моделирования тромбоза
3.7. Состояние тканей региона v. femoralis
через 5 недель после моделирования тромбоза
Глава 4. Оценка процессов восстановления кровотока в регионе
тромбированной вены на основании морфометрии
4.1. Изменение относительной площади сосудов на срезе тканей
4.2. Изменение численной плотности сосудов на срезе тканей
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы:
В настоящее время происходит постоянное увеличение числа больных с сосудистыми тромбозами. Профилактика и лечение данной патологии является одной из острейших и наиболее значимых проблем современной медицины во всем мире. Около 30% пациентов, перенесших тромбоз сосудов головного мозга, погибают в ближайший месяц, а еще у 20% в течение 3 месяцев развивается рецидив заболевания (Шевченко Ю.Л. и др., 2005). Реваскуляризация пораженных вследствие сосудистого тромбоза тканей проходит 2 основными путями: развитием коллатерального кровотока и реканализацией самого тромба. Оба этих процесса протекают в течение времени, очень часто, в случае поражения магистральных сосудов, достаточного для некротизирования заинтересованных тканей и, даже, органов и конечностей. Анализ причин неудачного лечения таких больных свидетельствует о том, что пути их преодоления состоят как в усовершенствовании технологии медикаментозного и хирургического лечения, так и в создании оптимальных условий для восстановления кровотока.
Венозный тромбоз может привести к хроническим осложнениям, требующим длительного лечения. Быстрая реканализации тромба снижает заболеваемость и инвалидизацию после тромботических осложнений. Ныне применяемая стандартная антикоагулянтная терапия предотвращает распространение, но не удаляет существующие тромбы, которые подвергаются медленному естественному растворению. Кроме того, антикоагулянтная терапия и тромболизис имеют значимый риск тяжелых кровотечений. Поэтому в клинической практике специалистам не хватает специфического лечения для пациентов с венозными тромбозами в сочетании с кровоизлияниями в мозг или активными желудочно-кишечными язвами. Процесс организации тромба напоминает заживление ран и является воспалительным процессом, который зависит от хемокинов и лейкоцитов (Thomas D.P., 1985; Langevelde van L.A. et al., 2005; Wakefield T.W. et al., 2008; Henke P.K., Wakefield T., 2009).

костной ткани.
Для исследования использовали клетки 2-3 пассажей.
Однако физические, морфологические и фенотипические признаки не являются окончательными специфическими критериями, которые могут быть использованы для точной идентификации АМСККП. Способность АМСККП к индуцированной дифференцировке in vitro в кости, жир и хрящ является единственным критическим требованием для определения предполагаемых популяций стволовых клеток.
Индукция остеогенной дифференцировки мезенхимальных стволовых клеток in vitro: АМСККП имеют различную морфологию, что зависит, в первую очередь, от способов их получения и культивирования. Поэтому перед применением необходимо проведение теста на возможность дифференцировки в заданном направлении (Tallheden Т. et al., 2003).
Поскольку АМСККП свойственна дифференцировка в клетки костной ткани и условия ее проведения наиболее воспроизводимы, этот вид дифференцирования обычно используют для характеристики культур стволовых клеток in vitro и он является типичным заданным по умолчанию путем развития для большинства АМСККП в культуре. Для индукции остеогенной дифференцировки использованы 0,1 рМ дезоксиметазон, 50 рМ аскорбиновую кислоту и 10 тМ ß-глицерофосфат («Sigma», США), вызывающие остеогенную дифферен-цировку (Niemeyer Р. et al., 2004а; Montjovent M.O. et al., 2004; Minamide A. et al., 2005; Cao T. et al., 2005; Laino G. et al., 2006; Romero-Prado M. et al., 2006; Chai G. et al., 2006; Jäger M., Krauspe R., 2007; Song S.J. et al., 2007; Bischoff D.S. et al., 2008; Liu J. et al., 2009a, 20096; Park K.H. et al., 2009a, 20096; Reichert J.C. et al., 2009; Hamidouche Z. et al., 2009, 2010; Shi X. et al., 2010; Wang Y. et al., 2010; Korecki C.L. et al., 2010; Hu J. et al., 2010).
Остеогенную дифференцировку определяли по 2 маркерам: по активности щелочной фосфатазы и минерализации межклеточного матрикса ионами кальция. Цитохимическое выявление щелочной фосфатазы проведено с использованием Нитротетразолиевого синего в присутствии субстрата щелочной фос-