Структурно - функциональные изменения гипоталамо –гипофизарно – гонадной системы крыс в условиях воздействия дестабилизирующих факторов

• Автор: Логинова, Анастасия Константиновна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Оренбург
• Количество страниц: 101 с. : 30 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. Гипоталамическая нонапептидергическая нейрогормо-нальная регуляция сперматогенеза в аспекте стрессорных воздей- 10 ствий и взаимоотношений про- и эукариот (обзор литературы)
1.1. Стресс, влияние стрессорных воздействий на сперматогенез и гипоталамо-гипофизарную систему млекопитающих и человека
1.2. Сперматогенез и роль гистонов и их вариантов в процессе созревания герминативных элементов
1.3. Роль гистонов как факторов врожденного иммунитета млекопитающих в построении взаимоотношений про- и эукариот ГЛАВА 2. Материал и методы исследования
ГЛАВА 3. Результаты собственного исследования
3.1. Структурно-функциональная реорганизация нонапептидерги-ческих нейросекреторных центров гипоталамуса и аденогипофиза 42 экспериментальных животных
3.2. Структурно-функциональная реорганизация сперматогенного эпителия и интерстициальных элементов семенников в условиях инфицирования E.coli, в том числе и при стрессорных воздействиях
3.3. Популяционная характеристика штамма E. coli 6В1 по степени выраженности и изменчивости антигистонового признака
Г ЛАВА 4. Обсуждение полученных результатов
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность исследования. Стресс, как процесс реализации неспецифических механизмов адаптации в ответ на внешнее раздражение (Селье Г., 1960) непосредственно связан с возрастанием активности гипоталамо-гипофизарной нейросекреторной системы (ГГНС) (Поленов A.JL, Константинова М.С., Гарлов П.Е., 1994; Акмаев И.Г., 2003; Акмаев И.Г., Гриневич
В.В., 2003; Стадников A.A., 1995; Стадников A.A., Бухарин О.В., 2012; Кузнецов C.JT. с соавт., 2009). Действие стрессорных факторов подразумевает не только напряжённость ГГНС, но и наличие ответа в регуляторно - зависимых органах, проявляющегося в соответствующих морфофункциональных изменениях, определяемых в рамках «болезней адаптации» (Филаретов A.A., 1987).
К стрессорным относят и инфекционные факторы, представленные как самими бактериями, так и продуктами их метаболизма (Семёнов A.B., 2000; Aly Н.А.А., Lightfoot D.A., El-Shemy H.A., 2010). Успешность адаптивных реакций организма во многом определяется биологическими свойствами микроорганизмов, в частности - наличием у возбудителей персистентных характеристик (Экология микроорганизмов человека, 2006), а также участием в процессе взаимодействия про- и эукариот нонапептидов гипоталамуса (Стадников A.A., 2001; Стадников A.A., Бухарин О.В., 2012).
На сегодняшний день, большой интерес представляет изучение характера влияния стрессорных факторов на процессы реализации адаптивных реакций в интерстициальных клетках семенников и в сперматогенном эпителии, отражающейся на половой функции в целом (Bray Т.М., Taylor C.G., 1993; Steinberger, A., Klinefelter G., 1993; Bindhu M.P., Annamalai P.T., 2004; Шевлгак H.H. с соавт., 2007).
Одним из новых и весьма актуальных направлений в изучении
стрессовых воздействий является установление в клетках эукариотических
организмов специфического комплекса морфофункциональных изменений,

развивающихся под действием бактерий, обладающих персистентными свойствами. На данный момент имеются сведения о морфофункциональных изменениях в клетках эукариот при их взаимодействии с бактериями, обладающими антилизоцимной, антикарнозиновой или антилактоферриновой активностью (Бухарин О.В. соавт., 2000; Карташова О. Л. с соавт., 2006; Бухарин О.В. с соавт., 2005; Козлова А.Н. с соавт., 2004).
Что же касается антигистоновой активности, то имеются лишь единичные сведения, касающиеся взаимодействия бактерий (Е.соП) с одноклеточными эукариотами (инфузориями) (Бухарин О.В. с соавт., 2004).
Показанные эффекты взаимодействия бактерий с антигистоновой активностью с одноклеточными эукариотами позволили сделать предположение о возможной роли этого свойства во взаимодействии бактерий с многоклеточными организмами, в том числе с клетками млекопитающих.
Исследование процессов сперматогенеза может рассматриваться как удобная модель для исследования закономерностей клеточной и репродуктивной биологии, генетики, радиобиологии, не только благодаря тому, что гаметогенез динамично отражает развитие мужских половых клеток, находящихся под строгим генетическим и гормональным контролем, и подчиняющихся строгой пространственно-временной организации (Пальцев М.А., Кветной И.М., 2008), но и за счет высокого уровня метаболизма гистоновых белков, являющихся мишеныо антигистоновой активности бактерий (Боже-домов В.А.с соавт., 2012).
Практическая значимость подобных исследований продиктована необходимостью познания патогенетических механизмов бактериальных инфекций урогенитального тракта мужчин. Следует отметить, что изучение влияний патогенной и условно-патогенной микрофлоры на процесс сперматогенеза уделяется недостаточное внимание. В то же время, многообразие существующих неблагоприятных факторов, способных нарушать процессы пролиферации и дифференцировки мужских половых клеток, обосновывают необходимость дальнейшего изучения диапазона адаптивных и компенсатор-

Для приготовления опытной пробы культуральную жидкость исследуемого штамма микроорганизмов объемом 0,6 мл смешивали с 0,2 мл приготовленного раствора гистонов.
Параллельно с опытной готовили две контрольные пробы:
Контроль 1. Для учета возможного ингибирующего или стимулирующего действия исследуемой культуры на тест-культуру определяли влияние культуральной жидкости исследуемого микроорганизма на ростовые характеристики индикаторной культуры. Для этого к 0,6 мл культуральной жидкости исследуемого штамма добавляли 0,2 мл изотонического раствора NaCl.
Контроль 2. К 0,6 мл МПБ добавляли 0,2 мл приготовленного раствора гистонов.
Опытную и контрольные пробы инкубировали в течение 60 мин при 37°С. После инкубации в опытную и контрольные пробы добавляли по 2,0 мл мясо-пептонного бульона и по 0,2 мл предварительно подготовленной и стандартизованной суспензии тест-культуры М. luteus ГИСК № 211001, приготовленной по стандарту мутности ГИСК им. JT.A. Тарасевича № 5 (5*108 КОЕ/мл). Для этого 16-18 часовую агаровую культуру М. luteus растворяли стерильным изотоническим раствором NaCl.
Опытную и контрольные пробы инкубировали в течение 24 ч при 37°С.
После инкубации содержимое опытной и контрольных проб тщательно перемешивали с помощью шейкера, образцы проб объемом 200 мкл автоматическим дозатором вносили в лунки 96-луночного плоскодонного полисти-ролового планшета и определяли оптическую плотность образцов на фотометре EL*808 (Biotek, США) при длине волны 490 нм.
Подсчёт значений антигистоновой активности исследуемого микроорганизма вели по формуле в приложении Microsoft Office Excel: