Сравнительное изучение показателей энтерального и межуточного обмена углеводов и липидов у трансгенных и интактных свиней

• Автор: Бузина, Ольга Викторовна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 154 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Введение

I. Обзор литературы

1:1. Метаболизм углеводов и липидов у свш гей

1.1.1. Углеводы и их биологическая роль

1.1.2 Особенности энтерального и межуточного обмена углеводов

у свиней

1.2.1. Липиды и их биологическая роль

1.2.2. Особенности липидного обмена у свиней

1.3. Гормон роста и его влияние на обмен веществ в организме

1.3.1. Создание трансгенных животных и влияние трансгенеза на организм
1.3.2. Методы трансгенеза в животноводстве
1.3.3. Определение трансгенности и экспрессии рекомбинантных генных конструкций
1.3.4. Влияние интеграции гена рилизинг-фактора гормона роста
на обмен веществ и рост животных
II. Объект и методы исследования
2.1. Цели и задачи исследований
2.2. Объект и общая схема исследований
2.3. Физиологические и биохимические методы исследования
III. Результаты собственных исследований
3.1. Морфологические и биохимические показатели крови у трансгенных и интактных свинок

3.2. Динамика питательных веществ в желудочно-кишечном тракте трансгенных и интактных свинок
3.2.1. Динамика переваримости отдельных фракций химуса по мере его движения по пищеварительному тракту
3.2.2. Содержание клетчатки в цельном химусе и фракции ПЧ по мерс его продвижения в пищеварительном тракте
3.2.3. Концентрация глюкозы в РФ химуса разных отделов ЖКТ
3.2.4. Концентрация ЛЖК в растворимой фракции химуса разных отделов ЖКТ
3.2.5. Содержание жира в цельном химусе, пищевых частицах и ПЭФ химуса разных отделов желудочно-кишечного тракта
3.3. Реакция среды химуса в разных отделах пищеварительного тракта
3.4. Сравнительные показатели роста и развития интактных и трансгенных свинок
Заключение
Выводы и рекомендации
Список использованной литературы
Приложения

Сокращения, используемые в диссертации
АТФ - аденозинтрифосфорная кислота
ЖКТ - желудочно-кишечный тракт
ЛЖК - летучие жирные кислоты
НЭЖК - неэтерифицированные жирные кислоты
ОЭ - обменная энергия
ПЧ - пищевые частицы
ПЭФ - плотная эндогенная фракция
РФ - растворимая фракция
СВ - сухое вещество
СК - сырая клетчатка
СП - сырой протеин
СТГ (ОН) - соматотропный гормон

Решагощее значение для использования трансгенных животных имеет характер и уровень экспрессии трансгена. Следует отметить, что не все интегрировавшиеся конструкции успешно экспрессируются в организме животных.
Для успешной экспрессии в органах и тканях трапсгенных животных необходимо наличие соответствующих регуляторных последовательностей: промотора, 5'-UTR, сигнала полиаденилирования, З'-UTR, энхансерных последовательностей. На уровень экспрессии положительное влияние оказывает наличие в генной конструкции интронных последовательностей. Так, включение в генную конструкцию 1-го интрона значительно повышает уровень экспрессии трансгена по сравнению с использованием кДНК. Тканевую специфичность экспрессии определяет используемый в конструкции промотор. Так, для направленной экспрессии в молочную железу животных используются регуляторные последовательности генов белков молока: as)-казеин, р-казеин, р-лактоглобулип и другие (Вгеш G., 1993).
Анализ экспрессии трансгенов может быть выполнен на двух уровнях: мРНК и белка. Для этих целей нашли применение различные молекулярногенетические методы: Nothern-блот, РТ-Г1ЦР, S1-анализ, рибонуклеазынй анализ, гель-электрофорез в полиакриламидном геле, Westem-блот анализ, иммуноферментный анализ, радиоиммунологический анализ, иммуногистохимический анализ.
Анализ мРНК. Для экстракции РНК из тканей животных наибольшее распространение в последнее время получил одноступенчатый метод с использованием гуанидинизотиоцианата (Chomczynski, Sacchi, 1993) или разработанного на его основе реагента Trizol (фирма Life Technologies).
Для выполнения Nothern-блот анализа 10-15 мкг общей РНК разделяют в денатурирующем агарозном геле с формальдегидом и затем, как и при выполнении Southern-блот анализа, переносят на нитроцеллюлозный или