Снижение роли Rho-киназы в регуляции тонуса сосудов и артериального давления при созревании симпатической нервной системы у крыс

• Автор: Тарасова, Надежда Валерьевна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 179 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Роль симпатической нервной системы в регуляции кровообращения

1.2 Регуляция тонуса сосудов и уровня артериального давления

1.3 Трофическое влияние симпатических нервов на гладкую мышцу сосудов

1.3.1 Механизмы трофического влияния

1.3.2 Изменения гладкой мышцы сосудов после денервации

1.4 Созревание симпатической иннервации сосудов в постнатальном онтогенезе

1.5 Особенности регуляции гемодинамики у крыс в раннем возрасте

1.5.1 Изменения АД

1.5.2 Изменения ЧСС

1.5.3 Изменения барорефлекторной регуляции сердечного ритма
1.5.4 Изменения функции надпочечников
1.6 Механизмы регуляции сокращения сосудов
1.6.1 Механизмы регуляции сокращения, зависящие от Са2
1.6.2 Чувствительность сократительного аппарата к Са '. роль в регуляции сокращения
1.7 Возрастные изменения механизмов сокращения гладкой мышцы
1.7.1 Изменения на уровне регуляции Са2+-гомеостаза гладкомышечных клеток
1.7.2 Изменения на уровне регуляции чувствительности сократительного аппарата к Са2+
1.7.3 Изменение вклада ROCK в регуляцию сокращения
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Общие методические подходы
2.2 Химическая десимпатизация
2.2.1 Протокол десимиатизации
2.2.2 Визуализация нервных волокон в стенке сосудов
2.3 Эксперименты in vivo
2.3.1 Изготовление катетеров
2.3.2 Вживление катетеров

2.3.2.1 Для регистрации АД у наркотизированных крыс
2.3.2.2 Для регистрации АД у бодрствующих крыс
2.3.3 Установка для прямого измерения АД
2.3.4 Поударная обработка сигнала АД
2.3.5 Эксперименты на наркотизированных крысах разного возраста
2.3.5.1 Исследование реакций на хлоризондамин, метоксамин и нитропруссид
2.3.5.2 Исследование эффектов ингибиторов ROCK
2.3.6 Исследование реакций на хлоризондамин, метоксамин и фасудил у
бодрствующих десимпатизированных крыс
2.3.7 Обработка результатов
2.3.7.1 Вычисление фоновых значений и спектральный анализ параметров
гемодинамики у бодрствующих крыс
2.3.7.2 Оценка изменений параметров гемодинамики при введении
фармакологических препаратов
2.3.8 Статистическая обработка результатов
2.4 Эксперименты на изолированных сосудах
2.4.1 Объект исследования
2.4.2 Использованные растворы
2.4.3 Приготовление препарата
2.4.4 Нормализация (определение оптимального растяжения сосуда)
2.4.5 Протоколы экспериментов
2.4.5.1 Исследование эффектов ингибиторов ROCK у крыс разного возраста
2.4.5.2 Исследование эффектов фасудила у десимпатизированных крыс
2.4.5.3 Исследование влияния фасудила на эндотелий-зависимое расслабление у десимпатизированных крыс
2.4.6 Обработка результатов
2.4.7 Статистическая обработка результатов
2.5 Исследование экспрессии белков в гладкомышечных клетках сосудов
2.5.1 Приготовление образцов ткани
2.5.2 Гомогенизация и экстрагирование образцов
2.5.3 Электрофоретическое разделение белков
2.5.4 Иммуноблоттинг
2.5.5 Обработка результатов
2.5.6 Статистическая обработка результатов 3 РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Исследование регуляции системной гемодинамики у крыс разного возраста
3.1.1 Изменения регуляции гемодинамики у крыс в постнатальном онтогенезе
3.1.1.1 Изменение массы тела в постнатальном онтогенезе
3.1.1.2 Изменения параметров гемодинамики у крыс в постнатальном онтогенезе
3.1.1.3 Изменения прессорных и депрессорных реакций в постнатальном оитогенезе88
3.1.2 Влияние ингибиторов ROCK на регуляцию гемодинамики у крыс разного возраста
3.1.2.1 Влияние фасудила на параметры гемодинамики и их изменения при введении агониста агадренорецепторов
3.1.2.2 Влияние Y27632 на параметры гемодинамики и их изменения при введении агониста агадренорецепторов
3.2. Исследование регуляции системной гемодинамики у неонатально десимпатизированных крыс
3.2.1 Оценка эффективности десимпатизации: морфологическое исследование иннервации
3.2.2 Масса тела, сердца и надпочечников у контрольных и десимпатизированных крыс
3.2.3 Значения параметров гемодинамики у контрольных и десимпатизированных крыс
3.2.4 Вариабельность параметров гемодинамики у контрольных и десимпатизированных крыс
3.2.5 Влияние фасудила на параметры гемодинамики у контрольных и десимпатизированных крыс
3.2.6 Влияние фасудила на изменения параметров гемодинамики при введении
агониста агадренорецепторов у контрольных и десимпатизированных крыс
3.3 Исследование сократительной активности изолированной подкожной артерии
3.3.1 Влияние ингибиторов ROCK на сократительные ответы подкожной артерии у крыс разного возраста

2.3 Эксперименты in vivo
2.3.1 Изготовление катетеров
Катетеры изготавливали из полиэтиленовых трубок. Для изготовления катетеров для бодрствующих крыс использовали три вида трубок: более толстую (наружный диаметр ~1 мм, внутренний диаметр -0,6 мм), более тонкую (наружный диаметр -0,6 мм, внутренний диаметр -0,3 мм) и двухканальную (внутренний диаметр каждого канала -0,3 мм).
Для изготовления катетеров для наркотизированных крыс в возрасте одной, двух и 3-4 недель использовали два вида трубок: первая - с наружным диаметром -0,6 мм и внутренним диаметром -0,3 мм - для подключения к установке, и вторая, более тонкая, с наружным диаметром 0,3-0,4 мм и внутренним диаметром 0,2-0,3 мм (для введения в сосуд). Для крыс в возрасте 4-5 недель и 7-8 недель часть катетера, которая вводилась в сосуд, была изготовлена из трубки с наружным диаметром -0,6 мм и внутренним диаметром -0,3 мм. Часть катетера, которую использовали для подключения крысы к установке, изготавливали из трубки с наружным диаметром -1 мм и внутренним диаметром -0,6 мм
Для соединения двух трубок их надевали на металлическую проволочку, место стыка нагревали вблизи о г разогретого паяльника, а затем осторожно сдвигали трубки по направлению друг к другу. Поскольку полиэтилен при нагревании плавится, концы трубок "слипались”, и получалось герметичное соединение. Внешний вид катетеров приведен на рис. 1. На катетерах, предназначенных для вживления в бедренную артерию и вену, делали спираль, которая предотвращает пережатие трубок при движении животного. Чтобы сделать спираль, трубку обматывали вокруг какого-либо металлического предмета, опускали на 5-10 сек в кипящую воду, а затем быстро охлаждали.
Перед операцией катетеры заполняли раствором гепарина (500 Ед/мл) и плотно затыкали кусочками лески подходящей толщины.