Противовоспалительные эффекты БТШ70 в индуцированном аллергическом воспалении дыхательных путей у мышей

• Автор: Троянова, Наталья Игоревна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 130 с. : ил.

Оглавление
1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Бронхиальная астма

2.1.1. Клеточный ответ при астме

2.1.2. Гуморальный иммунный ответ при астме

2.2. Белки теплового шока

2.2.1. Семейства белков теплового шока

2.2.2. Семейство БТШ

2.2.3. БТШ70 и иммунитет

2.2.4. БТШ70 в аллергии и астме

2.2.5. БТШ70 при воспалении дыхательных путей
2.2.6. БТШ70 в регуляции активности нейтрофилов
2.3. Активные формы кислорода
2.4. МАБРН-оксидаза
2.4.1. Свойства и функции компонентов ИАБРН-оксидазы
2.4.2. Ингибиторы ИАБРН-оксидазы
2.4.3. ИАБРН-оксидаза и цитоскелет
2.4.4. Взаимодействие БТШ70 и ЫАБРН-оксидазы
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Буферные растворы
3.2. Животные и клеточные модели
3.2.1. Животные
3.2.2. Индукция воспаления дыхательных путей с помощью овальбумина
3.2.3. Определение общего количества и популяционного состава клеток бронхоальвеолярного лаважа (бронхоальвеолярного смыва)
3.2.4. Определение уровня цитокинов в бронхоальвеолярных лаважах

3.2.5. Определение уровня иммуноглобулинов
3.2.6. Выделение клеток и приготовление клеточных суспензий
3.2.7. Регистрация уровня внеклеточной РНК
3.2.8. Регистрация активных форм кислорода
3.2.9. Индукция «окислительного взрыва»
3.2.10.Ингибиторы продукции АФК
3.3. Выделение белка БТШ70 из внутренних органов мышей
3.3.1. Получение гомогенатов печени и почек мышей
3.3.2. Выделение БТШ70 с помощью аффинной хроматографии
на АТФ-агарозе
3.3.3. Диализ в бикарбонатном буфере
3.3.4. Выделение БТШ70 с помощью аффинной хроматографии
на №-агарозе
3.3.5. Очистка БТШ70 от контаминации бактериальных липополисахаридов
3.3.6. Определение концентрации белка
3.3.7. Электрофорез в ПААГ
3.3.8. Вестерн-блот анализ
3.3.9. Определение содержания примеси ЬРБ
3.4. Статистическая обработка результатов
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Особенности получения и очистки белка БТШ
4.2. Характеристика острой и эффекторной фазы аллергического воспаления дыхательных путей
4.3. Общее количество и популяционный состав клеток бронхоальвеолярных лаважей
4.4. Изменение уровня цитокинов в дыхательных путях
4.5. Продукция аллерген-специфических антител
4.6. Снижение уровня секреции проаллергических цитокинов под действием БТШ
4.7. Влияние БТШ70 на системную и локальную продукцию аллерген-специфических иммуноглобулинов
4.8. Подавление роста общего количества и изменение популяционного состава клеток БАЛ мышей с аллергическим воспалением дыхательных путей после введения БТШ
4.9. Оценка влияния БТШ70 на количество нейтрофилов в костном мозге мышей с индуцированным аллергическим воспалением
4.10. Влияние БТШ70 на уровень внеклеточной РНК в культуре активированных нейтрофилов
4.11. Оптимизация клеточной модели для исследования антиоксидантной активности БТШ
4.12. Исследование влияния экзогенного БТШ70 на продукцию АФК in vitro .
4.13. Изменение продукции активных форм кислорода клетками костного мозга мышей на различных стадиях аллергического воспаления дыхательных путей .
5. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
6. ВЫВОДЫ
7. СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

противовоспалительную активность (Kacimi, Yenari, 2015; Polla et al., 1998; Yang et al., 2005).
2.2.5. БТШ70 при воспалении дыхательных путей
Прямого противовоспалительного эффекта БТШ70 при аллергическом воспалении дыхательных путей до настоящего времени продемонстрировано не было. Однако было показано, что БТШ70 оказывает протективное воздействие при развитии фиброзов легких различной этиологии (Fujibayashi et al., 2009; Tanaka et al., 2010). Повышенная экспрессия БТШ70 была зарегистрирована при исследовании механизмов супрессорного воздействия нестероидных препаратов на тучные клетки, играющие важную роль в аллергических заболеваниях (Mortaz et al., 2009). И, наконец, повышенное содержание БТШ70 было обнаружено в составе экзосом, выделенных из БАЛ мышей, у которых была выработана толерантность к аллергену (Prado et al., 2008). Более того, было показано, что превентивная интраназальная иммунизация такими экзосомами мышей препятствовала развитию аллергического воспаления дыхательных путей, вызванного сенсибилизацией и провокацией аллергеном из пыльцы оливкового дерева (Prado et al., 2008). Механизм протективного эффекта БТШ70 при воспалительных процессах, в том числе аллергических и воспалениях дыхательных путей, до сих не изучен, однако, ведутся активные исследования супрессирующего воздействия БТШ70 на различные типы клеток иммунной системы.
2.2.6. БТШ70 в регуляции активности нейтрофилов
В отличие от эозинофилов, нейтрофилы не являются специфическими
клетками, отличающими аллергическое воспаление дыхательных путей от
воспалительных процессов иной природы. Как и в случае ингаляции экзогенных
патогенов грибной или бактериальной природы, после вдыхания аллергена
сенсибилизированными животными или пациентами с аллергией инфильтрация