Протекторное действие активированного протеина C при нейротоксичности и ишемии мозга

• Автор: Савинкова, Ирина Григорьевна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 140 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1.Сопряжение процессов воспаления, свертывания и нейродегенерации..

1.2.Активированный протеин С (АРС): структура, образование, функции..

1.2.1. Использование АРС в моделях ишемического повреждения головного мозга

1.3.Тромбин: структурные особенности тромбина и свойства

1.4. Энтеропептидаза

1.5.Рецепторы, активируемые протеиназами

1.5.1.Новые механизмы смещённого агонизма при активации PARI АРС

1.5.2.Экспрессия рецепторов, активируемых протеиназами

1.6. Эндотелиальный рецептор протеина С (EPCR)
1.6.1. Экспрессия EPCR
1.7. Эксайтотоксичность, как модель нейродегенерации
1.8.Участие тучных клеток в воспалительной реакции
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Исследование влияния активированного протеина С и механизмов реализации его эффектов на культивируемые гиппокампальные нейроны при глутаматной эксайтотоксичности
3.1.1. Исследование действия активированного протеина С на выживаемость культивируемых нейронов в норме и при эксайтотоксичности, вызванной глутамагом
3.1.2. Исследование действия активированного протеина С на активацию проапоптотического каскада NfkB и транслокации NFKBp65 в ядро нейронов
3.1.3. Исследование влияния активированного протеина С на экспрессию мРНК PAR и EPCR в гиппокампальных нейронах при глутаматной эксайтотоксичности

3.1.4. Исследование влияния активированного протеина С на экспрессию белка PARI и EPCR в гиппокампальных нейронах при глутаматной эксайтотоксичности
3.2. Исследование действия пептидов-аналогов привязанного лиганда, освобождаемого активированным протеином С, на выживаемость гиппокампальных нейронов при глутаматной эксайтотоксичности
3.3. Исследование действия АРС и пептидов-аналогов привязанного лиганда PARI на выживаемость гиппокампальных нейронов мышей, нокаутных по 2 изоформе ß-аррестина, в модели глутаматной эксайтотоксичности
3.4. Исследование влияния активированного протеина С на кокультуру гиппокампальных нейронов и перитонеальных тучных клеток, полученных в модели острого воспаления
3.5. Влияние активированного протеина С на размеры зоны поражения и морфометрические показатели нейронов и нейроглии в перифокальной

3.6. Исследование действия тромбина в низкой концентрации на экспрессию мРНК PAR и EPCR в гиппокампальных нейронах при глутаматной эксайтотоксичности
3.7. Исследование влияния полноразмерной энтеропептидазы быка и легкой цепи рекомбинантной энтеропептидазы человека на выживаемость культивируемых нейронов в сравнении с действием низкой концентрации
тромбина
4.Обсуждение
5.Вывод ы
6.Список литературы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВИЧ - вирус иммунодефицита человека Глу - глутамат
ГЭБ - гематоэнцефалический барьер ДНК - дезоксирибонуклиновая кислота мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота ОТ - обратная транскрипция ПНС- периферическая нервная система ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция в режиме реального времени
ТМ - тромбомодулин
АРС - активированный протеин С
EPCR - эндотелиальный рецептор протеина С
ТФ - тканевой фактор
ФХа - фактор X активированный
цАМФ - циклический аденозинмонофосфат
ЦНС - центральная нервная система
ЭП - энтеропептидаза
[Ca2li - внутриклеточная концентрация ионов кальция АМРА рецептор - ионотропный глутаматный рецептор, синтетический агонист DL-a-amino-3-hydroxy-5-methyI-4-isoxasole propionic acid ARAC - арабинозинмоноцитозид ВЕК - полноразмерная энтеропептидаза быка CG - катепсин G
EPCR - эндотелиальный рецептор протеина С
GRK - киназы рецепторов, сопряженных с G-белком
HBSS - Hepes-солевой буфер
1кВ - ингибитор каппа В
IL-4 - интерлейкин

последовательности из четырех положительно заряженных остатков энтеропептидазы (96-99) (Lu, 1999). При этом энтеропептидаза быка содержит последовательность -Lys-Arg-Arg-Lys-, свиньи и человека -Arg-Arg-Arg-Lys- (Yuan, 1998). Считается, что в искусственных субстратах энтеропептидазы аминокислотные остатки аспарагиновой кислоты эквивалентны остаткам глутаминовой кислоты, а остаток лизина - остатку аргинина. (Lu, 1999).
Рекомбинантные легкие цепи энтеропептидазы быка (L-BEK) (Lu, 1999) и человека (L-HEP) (Gasparian, 2003) сохраняют высокую специфичность природного фермента по отношению к гидролизу полипептидной цепи субстрата после последовательности DDDDK. При этом эффективность гидролиза и некоторые его закономерности заметно различаются, как при сравнении полноразмерного природного и укороченного рекомбинантного фермента, так и в случае легких цепей энтеропептидазы человека и быка (Mikhailova, 2007).
Энтеропептидаза является трансмембранной сериновой протеиназой 2-го типа, локализованной на границе двенадцатиперстной кишки и слизистой тонкого кишечника. Энтеропептидаза синтезируется в пищеварительном тракте в виде предшественника - проэнтеропептидазы и активируется под действием трипсина или, возможно, дуоденазы. Энтеропептидаза превращает трипсиноген в трипсин, отщепляя специфический активационный пептид Asp-Asp-Asp-Asp-Lysjlle (DDDDK) (Kunitz 1939; Yamashina 1956), который является консервативным и содержится в структуре трипсиногенов всех позвоночных животных (Maroux, et all., 1971) (Рис. 11).
Активация панкреатических проферментов в кишечнике является защитным механизмом, предотвращающим протеолитическое повреждение поджелудочной железы и ее протоков. При нарушениях, связанных с дефицитом энтеропептидазы возникают такие заболевания, как диарея и тяжелая кишечная мальабсорбция (Hadom, 1969; Haworth, 1971). При патологии энтеропептидазу обнаруживают в кровотоке (McCutcheon, 2000) и