Исследование вклада сердечного миозин-связывающего белка C во взаимодействие сократительных белков миокарда

• Автор: Щепкин, Даниил Владимирович
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Екатеринбург
• Количество страниц: 129 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений

Введение

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Сердечная поперечнополосатая мышечная ткань

1.2. Структура саркомера

1.3. Структура тонкого филамента

1.4. Вызванные кальцием структурные изменения в тонком филаменте

1.5. Кооперативность

1.6. Структура и свойства миозина

1.7. Структура и свойства сердечного миозин-связывающего белка-С (сМуВР-С)
1.8. Регуляторная функция сердечного миозин-связывающего белка-С (сМуВР-С)
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ и МЕТОДЫ
2.1. Получение мышечных белков
2.2. Определение АТФ-азной активности миозина
2.3. Турбидиметрия
2.4. Метод искусственной подвижной системы
2.5. Статистическая обработка данных 55 Глава 3. ПОЛУЧЕНИЕ СЕРДЕЧНОГО
МИОЗИН-СВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА С (сМуВР-С)
Глава 4. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ СЕРДЕЧНОГО
МИОЗИН-СВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА С С АКТИНОМ 5
Глава 5. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ СЕРДЕЧНОГО
МИОЗИН-СВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА С С МИОЗИНОМ
5.1. Влияние сердечного миозин-связывающего белка С на актин-активируемую Mg2+-ATФ-aзнyю активность изоформ скелетного и сердечного миозинов

5.2. Влияние сердечного миозин-связывающего белка С на регулируемую 1У^2+-АТФазную активность филаментов изоформ скелетного и сердечного
миозинов
5.3. Влияние сердечного миозин-связывающего белка С на скорость движения филаментарного актина по изоформам скелетного и сердечного миозинов
5.4. Влияние сердечного миозин-связывающего белка С на скорость движения реконструированного актин-тропомиозинового филамента по изоформам скелетного и сердечного миозинов
5.5. Влияние сердечного миозин-связывающего белка С на связь «рСа-скорость» для изоформ скелетного и сердечного миозинов
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Выводы. Практические рекомендации
Список литературы

Список сокращений
АДФ - аденозиндифосфат
АТФ - аденозинтрифосфат
БСА - бычий сывороточный альбумин
ДСН - додецил сульфат натрия
ПААТ - полиакриламидный гель
ТМРФ - тетраметилродамин-фаллоидин
ТЦМ - тяжелые цепи миозина
ЭГТА — этиленгликоль тетрауксусная кислота
ЭДТА - этилдиметил тетрауксусная кислота
А7ТтТп — регуляторная группа тонкого филамента, состоящая из семи
молекул актина, тропомиозина и тропонина
сМуВР-С - сердечный миозин-связывающий белок С
сТт - сердечный тропомиозин
F-актин - филаментарный актин
G-актин — глобулярный актин
h - коэффициент Хилла
Km - константа Михаэлиса
LC - легкие цепи миозина
MES - 2-(К-морфолино) этансульфоновая кислота
рСа - отрицательный десятичный логарифм концентрации кальция
ТпС - тропонин С
ТпС-ТпС — тропонин-тропониновая кооперативность Тп1 - тропонин I ТпТ - тропонин Т
Vmax - максимальная скорость гидролиза АТФ ХЬ - поперечный мостик
ХЬ-ТпС - мостико-тропониновая кооперативность

мыши, экспрессирующие мутантный сМуВР-С, в котором аминокислотные остатки серина в т-домене заменены на аланин (т.е, имитируется состояние, когда сМуВР-С дефосфорилирофан) обладают различным фенотипом в зависимости от изоформы сердечного миозина. Так мыши, экспрессирующие а-цепь миозина, выживают после рождения, но обладают сниженной сократимостью миокарда, а также уменьшенной фракцией выброса. Мыши, экспрессирующие р-цепь миозина, погибали вскоре после рождения.
Трансгенные мыши с мутантным сердечным С-белком, содержащим вместо остатков серина в т-домене, остатки аспартата (имитация фосфорилированного состояния сМуВР-С) выживали после рождения. Папиллярные мышцы сердца таких животных развивали большую скорость ненагруженного укорочения, КтаХ5 и мощность по сравнению с контролем, В свою очередь такие характеристики соотношения “рСа-сила”, как рСа50 и коэффициент Хилла, не изменялись в зависимости от фосфорилирования С-белка. Стоит отметить, что такие изменения в сократительных характеристиках папиллярных мышц не зависели от соотношения изоформ тяжёлых цепей миозина.