Исследование регуляции внеклеточной ГАМК в первом слое неокортекса у мышей в ранний постнатальный период

• Автор: Мяхар, Ольга Леонидовна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 147 с. : ил.

Содержание
Содержание

Список использованных сокращений

Введение

Актуальность темы

Цель и задачи исследования

Научная новизна работы

Теоретическая и практическая значимость результатов исследования

Апробация работы

Структура и объем работы

ГЛАВА I. Обзор литературы

1. Гамма-аминомасляная кислота
1.1. Общие представления о ГАМК
1.2. ГАМК-опосредованая передача сигналов в коре в период онтогенеза
1.3. ГАМЕС как сигнал развития
1.4. ГАМЕС-эргические нейроны
1.5. Методы измерения внеклеточной концентрации ГАМК
2. Кортикогенез в мозге человека
2.1. Слои развивающейся коры головного мозга
3. Клетки Кахаля-Ретциуса, временные нейроны первого слоя неокортекса
3.1. Эмбриогенез КР-клеток
3.2. Морфология и электрофизиология КР клеток
3.3. Рилин
ГЛАВА II. Материалы и методы

1. Объект исследования:
2. Иммунофлуоресцентная покраска срезов
2.1. Растворы:
2.2. Этапы покраски
3. Электрофизиологические исследования маргинальной зоны коры мышей линии С57ВЪ/
3.1. Реактивы, использованные в работе:
3.2. Использованные в работе растворы:
3.3. Приготовление переживающих сагиттальных срезов мозга:
3.4. РашЬ-Лагпр и электрическая стимуляция клеток Кахаля-Ретциуса..
ГЛАВА III. Результаты
1. Расположение ГАМК-эргических волокон маргинальной зоны неокортекса, образующих синапсы на отростках клеток Кахаля-Ретциуса, относительно самих КР-клеток
2. Электрофизиология клеток Кахаля-Ретциуса
2.1. Выявление наличия или отсутствия десенситизации постсинаптических ГАМКА-рецепторов концентрациями аплицируемой ГАМК
2.2. Исследование механизмов, ответственных за регуляцию концентрации внеклеточной ГАМК в маргинальной зоне неокортекса..
2.3. Измерение внеклеточной концентрации ГАМК в маргинальной зоне неокортекса и ее изменения в течение первой недели жизни
ГЛАВА IV. Обсуждение результатов
1. Картина эксперимента
2. Отсутствие десенситизации постсинаптических ГАМКл-рецепторов различными концентрациями аплицируемой ГАМК
3. Заблокированы все механизмы, ответственные за регуляцию концентрации внеклеточной ГАМК в маргинальной зоне
4. Измерение внеклеточной концентрации ГАМК в маргинальной зоне неокортекса и ее изменения в течение первой недели жизни
Заключение
Выводы
Список литературы

4) Инвазивность. При заборе пробы неизбежно обширное повреждение ткани. Возникают такие виды повреждения тканей, как: воспаление, глиоз, раздутые аксоны. (Clapp-Lilly и др., 1999)
5) Пробы диализата отражают изменения в очень ограниченном объеме паренхимы органа. (Тимофеев И., 2007)
6) Высокая стоимость анализаторов и расходных материалов.
Сниффер клетки (Sniffer cells).
Для измерения внешней концентрации ГАМК также ранее использовались так называемые «sniffer cells» - не нейрональная клеточная линия, экспрессирующая высокоафинные ГАМКА-рецепторы. При использовании этого подхода, концентрация нейромедиатора в корковых органотипичных культурах и остро приготовленных срезах от эмбрионов мышей Е14,5, была равна приблизительно 0,5 рМ (Cuzon и др., 2006). Л пространственное разрешение этого метода определялось размером «sniffer cells».
Плюсами данного метода можно считать гораздо большую точность полученых результатов, приближенных к своим физиологическим значениям. Минус же данной методики заключается в том, что концентрация ГАМК могла быть измерена таким образом только у поверхности среза и полученные величины могут значительно отличаться от ее концентрации в глубине среза.
Таким образом, обсудив все, что связано с гамма-аминомасляной кислотой, измерение концентрации которой в маргинальной зоне неокортекса являлось одной из основных целей данной работы, стоит чуть подробнее остановиться непосредственно на нейронах развивающейся коры в ранний постнатальный период. Для чего будут кратко изложены лишь самые основы кортикогенеза, применительно к специфике данного исследования.