Изучение противосудорожного действия белка теплового шока 70 кДа в моделях генерализованной эпилепсии у крыс

• Автор: Ницинская, Лариса Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 186 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Этиология и патогенез эпилепсии

1.1.1. Механизмы возникновения и развития эпилепсии

1.1.2. Экспериментальные модели эпилепсии

1.2. Протективные свойства белков теплового шока

1.2.1. Структура и функции белков теплового шока 70 кДа

1.2.2. Защитные свойства внутриклеточных белков теплового шока 70 кДа

1.2.2.1. Терапевтический потенциал индукции внутриклеточных белков

теплового шока 70 кДа
1.2.2.2. Эффекты блокаторов белков теплового шока 70 кДа
1.2.3. Защитные свойства внеклеточных белков теплового шока 70 кДа
1.2.4. Затпитные свойства экзогенных белков теплового шока 70 кДа
1.2.5. Участие белков теплового шока 70 кДа в защите функции синапсов.
1.2.5.1. Участие эндогенных белков теплового шока 70 кДа в защите
функции синапсов
1.2.5.2. Участие экзогенных белков теплового шока 70 кДа в защите
функции синапсов
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.2. Операции
2.3. Используемые модели фармакологических судорог
2.3.1. Генерализованные судороги, вызванные ІЧ-метил-Р-аспарагиновой кислотой
2.3.2. Коразоловые судороги
2.4. Использование биофлавоноида кверцетина для блокады экспресии индуцибельной изоформы Нвр70і
2.5. Метод теплового прекондиционирования
2.6. Метод получения, очистки и введения препарата экзогенного Hsp70i/Hsc
2.7. Метод определения содержания индуцибелыюй изоформы Hsp70i в плазме крови крыс
2.7.1. Описание экспериментальных серий
2.7.2. Метод иммуно-ферментного анализа
2.8. Метод определения содержания индуцибельной изоформы Hsp70i в
структурах головного мозга крыс
2.8.1 Описание экспериментальных серий
2.8.2. Приготовление электрофоретических проб
2.8.3. Гель-электрофорез
2.8.4. Перенос и иммуноблоттинг
2.9. Метод изучения белок-белковых взаимодействий
2.10. Методы статистической обработки данных
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 3. Влияние ингибитора экспрессии Hsp70i кверцетина на судорожную активность и послесудорожные двигательные нарушения у крыс линии Вистар
3.1. Изменение содержания индуцибельной изоформы Hsp70i в плазме крови и структурах головного мозга при системном введении кверцетина
3.2. Влияние кверцетина на моторные судороги и послесудорожные двигательные нарушения, вызванные N-метил-Р-аспарагиновой кислотой
3.2.1. Характеристика моторных компонентов судорожного припадка и послесудорожных двигательных нарушений, индуцированных N-Memun-D-аспарагиновой кислотой
3.2.2. Исследование содержания индуцибельной изоформы Hsp70i в плазме крови и структурах головного мозга крыс после судорог, вызванных введением N-Memun-D-acnapazuHoeott кислоты

3.2.3. Влияние кверцетина на моторные компоненты судорог и послесудорожные двигательные нарушения, инициированные N-Memun-D-аспарагиновой кислотой
3.3. Изучение влияния кверцетина на моторные судороги и послесудорожные двигательные нарушения, вызванные коразолом у крыс линии Вистар
3.3.1. Характеристика моторных компонентов судорожного припадка и послесудорожных двигательных нарушений, индуцированных коразолом
3.3.2. Исследование содержания индуцибельной изоформы Hsp70i в плазме крови и структурах головного мозга крыс после коразоловых судорог
3.3.3. Влияние кверцетина на компоненты моторных судорог и
послесудорожные двигательные нарушения, вызванные коразолом
3.4. Резюме
Глава 4. Исследование эффектов теплового прекондиционирования на моторные судороги и послесудорожные двигательные нарушения в моделях генерализованной эпилепсии
4.1. Исследование содержания индуцибельной изоформы Hsp70i в плазме крови и структурах головного мозга крыс после процедуры теплового прекондиционирования
4.2. Влияние теплового прекондиционирования на моторные компоненты судорог и послесудорожные двигательные нарушения, вызванные введением N-метил-Р-аспарагиновой кислоты
4.3. Изучение влияния теплового прекондиционирования на моторные компоненты судорог и послесудорожные двигательные нарушения, индуцированные коразолом
4.4. Резюме
Глава 5. Влияние кверцетина на противосудорожные эффекты теплового
прекондиционирования
5.1. Влияние кверцетина на содержание индуцибельной изоформы Hsp70i в плазме крови и структурах головного мозга после процедуры теплового прекондиционирования

защищало нейроны сетчатки от апоптоза, вызванного N-метил-О-аспарагиновой кислотой [Kwong et al., 2003]. Было показано, что содержание индуцибельной и конститутивной форм белка увеличивается в пре- и постсинаптической мембране после теплового стресса [Bechtold et al, 2000]. Кроме того, усиление экспрессии Hsp70i путём теплового прекондиционирования защищало ГАМК-, глицин- и глутаматергическую синаптическую передачу при повреждающем действии высоких температур и аноксии [Kelty et al., 2002].
Пуотивосудорожног действие теплового пуекондиииониуования
Как уже было упомянуто выше, в ряде публикаций показано увеличение экспрессии Hsp70i после генерализованных судорог, спровоцированных химическим путем. Однако какое значение в механизмах эпилептогенеза имеет увеличение экспрессии Hsp70i в мозге, пока не вполне понятно.
Впервые противосудорожное действие теплового прекондиционирования было показано на модели бикукуллин-индуцированных судорог [Yang et al., 1996]. Авторы работы подвергали крыс тепловому прекондиционированию, аналогичному использованному в нашей работе, а затем через 15 ч делали инъекцию бикукуллина. Было выявлено снижение
электроэнцефалографических и поведенческих судорог. В другом исследовании было выявлено, что кратковременное перегревание крыс способствовало значительному снижению гибели нейронов после судорог, инициированных каиновой кислотой, и ослабляло чувствительность к бикукуллину [Duveau et al.,
2005]. Противосудорожное действие теплового прекондиционирования было показано у крыс, генетически предрасположенных к аудиогенной эпилепсии [Худик, 2009]. Однако для полной оценки противосудорожного потенциала теплового прекондиционирования необходимо исследовать ряд экспериментальных моделей. Кроме того, представляется важным оценить вклад Hsp70i в противосудорожное действие теплового прекондиционирования. Будет ли увеличение содержания Hsp70i в организме животных путем