Антигипоксическое и нейропротекторное действие N-арахидоноилдофамина при моделировании острой гипоксии in vivo и in vitro

• Автор: Митрошина, Елена Владимировна
• Шифр специальности: 03.03.01, 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 147 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Эндогенная каннабиноидная система

1.1.1. Лиганды каннабиноидных рецепторов. N-

арахидоноилдофамин

1.1.2. Биосинтез и деградация эндоканнабиноидов

1.1.3. Каннабиноидные рецепторы и их локализация в головном

мозге

1.1.4. Прочие рецепторы, связывающие каннабиноиды

1.2. Сигнальные пути, запускаемые эндоканнабиноидной
системой
1.2.1. Ретроградная модуляция синаптической передачи эндоканнабиноидами
1.3. Нейропрогекторное действие эндоканнабиноидов
1.4. Роль эндоканнабиноидов в коррекции гипоксических и ишемических состояний мозга
1.5. Изучение сетевой активности нейронов
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект исследования
2.2. Схема эксперимента
2.2.1. Схема экспериментов in vitro
2.2.2. Схема экспериментов in vivo
2.3. Культивирование первичных диссоциированных клеток гиппокампа
2.4. Методы оценки сетевой активности нейронов in vitro
2.4.1. Биоэлектрическая спонтанная активность
2.4.1.1. Мультиэлектродные матрицы MED64 и МЕА
2.4.1.2. Регистрация и анализ спонтанной сетевой биоэлектрической

активности нейронов
2.4.2. Функциональный кальциевый имиджинг
2.5. Иммуноцитохимические методы
2.6. Оценка жизнеспособности культивируемых клеток в диссоциированной культуре
2.7. Моделирование нормобарической гипоксии in vitro
2.8. Моделирование острой гипобарической гипоксии in vivo
2.9.Методы оценки антигипоксического и нейропротекторного действия исследуемого соединения при моделировании острой гипобарической гипоксии in vivo
2.9.1. Тест «открытое поле»
2.9.2. Тест «Водный лабиринт Морриса»
2.10. Статистическая обработка результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Исследование антигипоксического и нейропротекторного действия N-арахидоноилдофамина при моделировании гипоксии in
vitro
3.1.1. Влияние N-арахидоноилдофамина на спонтанную биоэлектрическую активность культивируемых клеток гиппокампа
при моделировании гипоксии
3.1.2. Влияние N-арахидоноилдофамина на спонтанную кальциевую активность культивируемых клеток гиппокампа при моделировании гипоксии
3.1.3. Влияние N-арахидоноилдофамина на выживаемость культивируемых клеток гиппокампа при моделировании
гипоксии
3.1.4. Влияние N-арахидоноилдофамина на распределение каннабиноидных рецепторов первого и второго типов в диссоциированных культурах гиппокампа при моделировании

гипоксии
3.2. Исследование антигипоксического и нейропротекторного
действия N-арахидоноилдофамина при моделировании гипоксии
in vivo
3.2.1. Влияние N-арахидоноилдофамина на выживаемость животных
при моделировании острой гипобарической гипоксии
3.2.2. Влияние N-арахидоноилдофамина на показатели двигательной и ориентировочно-исследовательской активности мышей в тесте «Открытое поле»
3.2.3. Влияние N-арахидоноилдофамина на навигационное научение и долговременную память у мышей в тесте «Водный лабиринт
Морриса»
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ишемическое повреждение мозга. Однако, несмотря на тот факт, что многочисленные исследования in vivo и in vitro показали пейропротекторное действие антагонистов различных глутаматных рецепторов при ишемии, последние клинические испытания не смогли доказать эффективность данных соединений. Кроме того, терапевтический потенциал блокаторов NMDA-рсцепторов ограничивается побочными поведенческими эффектами, такими как психоз и гиперлокомоция (Won et al., 2002; Xiong, 2009; Chao, Sheng-Tian, 2013). Таким образом, представляется необходимым поиск новых, более результативных препаратов для предотвращения глутаматной токсичности при ишемическом повреждении, одним из которых являются соединения класса эндоканнабиноидов, которые за счет специфического механизма - ретроградной регуляции синаптической передачи -препятствуют избыточному выбросу нейромедиаторов (в том числе, глутамата) в синаптическую щель, защищая таким образом клетку от эксайтотоксичности (рис. 5) (Mechoulam R. et al., 2002; Генрихе с соавт., 2010).
Одной из первых работ, показавших иейропротекторпый эффект эндоканнабиноидов, было исследование, обнаружившее, что синтетические агонисты CBR, WIN55,212-2 и CGS19755, уменьшают гибель клеток, вызванную низким содержанием магния в среде, причем нейропротекторный эффект блокировался римонабанотом (Shen, Thayer, 1998). При закрытой травмой головы у крыс 2-АГ уменьшал отек мозга и объем инфаркта, причем эффект блокировался SR141716A (Panikashvili et al., 2001). У CBR-1-нокаутных мышей 2-АГ не оказывал защитного эффекта, а восстановление животных после травмы шло медленнее, чем у контрольной группы (Panikashvili et al., 2005).