Цитологические и физиолого-биохимические особенности галотолерантных микромицетов

• Автор: Смолянюк, Евгения Владимировна
• Шифр специальности: 03.02.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 147 с. : ил.

Оглавление
Введение

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Классификация галофильных и галотолерантных микромицетов и характеристика их почвенных местообитаний

1.2. Разнообразие микромицетов гиперсоленых местообитаний

1.2.1. Представители порядка ИоМдеакв

1.2.2. Представители порядка СарпосИа1ев, род С1ас1озропит

1.2.3. Представители порядка 8асскаготусе1а1ея

1.2.4. Представители отдела Ваз1сИотусо1а

1.3. Морфологические, цитологические и физиолого-биохимические особенности микроскопических грибов засоленных местообитаний
1.3.1. Морфология мицелия микромицетов при культивировании на соленых питательных средах
1.3.2. Физиологические особенности мицелия микромицетов при культивировании на соленых питательных средах
1.3.3. Биохимические особенности клеток микромицетов в гиперсоленых условиях культивирования
1.3.4. Ультраструктура клеток мицелия микромицетов в гиперсоленых условиях культивирования
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Характеристика засоленых почв в местах сбора образцов
2.2. Питательные среды
2.3. Изоляция микромицетов
2.4. Тест на галотолерантность
2.5. Тест на ксеротолерантность
2.6. Идентификация микромицетов
2.6.1. Идентификация по морфолого-купътуралъным признакам
2.6.2. Определение систематического положения микромицетов группы МусеНа з1епИа

2.7. Исследование цитологии галотолерантных микроскопических грибов методами световой и флуоресцентрой микроскопия
2.7.1. Изучение влияния хлористого натрия на вакуолярную систему клеток микромицетов методом световой микроскопии
2.7.2. Изучение влияния хлористого натрия на накопление волютина в клетках микромицетов методом световой микроскопии
2.7.3. Изучение влияния хлористого натрия на состояние хондриома в клетках микромицетов методом флуоресцентной микроскопии
2.7.4. Изучение влияния хлористого натрия на накопление олеосом в клетках микромицетов методом дифференциально-интерференционного контраста (DIC)
2.8. Исследование ультраструктуры и элементного состава клеток микромицетов методами электронной микроскопии
2.8.1. Изучение ультраструктуры и определение элементного состава клеткок микролшцетов методами трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ)
2.8.2. Определение элементного состава клеток Fusarium incarnatum и Aspergillus repens методом энергодисперсионной рентгеновской спектроскопии (ЭДС)
2.9. Измерение дыхательной активности протопластов Fusarium incarnatum
2.9.1. Выделение протопластов из мицелия гриба F. incarnatum
2.9.2. Измерение потребления кислорода протопластами F. incarnatum
2.9.3. Определение содержания общего белка в протопластах F. incarnatum
2.10. Определение содержания нейтральных липидов мицелия и жирнокислотного состава фосфолипидов мембран клеток мицелия F. incarnatum
2.10.1. Экстракция липидов из мицелия F. incarnatum

2.10.2. Определение состава нейтральных липидов мицелия Д. тсагпаШт
2.10.3. Количественный анализ жирнокислотного состава основных фосфолипидов мембран мицелия Р. тсагпаШт
2.11. Количественный анализ основных растворимых углеводов цитозоля клеток мицелия Д. тсагпаШт
2.12. Анализ полифосфатов, экстрагированных из мицелия Д. тсагпаШт.
2.12.1. Экстракция полифосфатов из мицелия А. тсагпаШт
2.12.2. Количественное определение полифосфатов и лабильного фосфора во фракциях, экстрагированных из мицелия А. тсагпаШт колориметрическим методом
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Изоляция микромицетов из мест природного засоления и их идентификация морфолого-культуральными и молекулярными методами.

3.1.1. Видовой состав микромицетов почв Черноморского побережья Болгарии
3.1.2. Видовой состав микромицетов почв побережья Мертвого моря.
3.1.3. Выделение микромицетов из почв побережья озера Баскунчак..
3.1.4. Определение видовой принадлежности микромицетов группы МусеИа я1егШа
3.2. Физиология и морфология штаммов грибов, выделенных из засоленных почв
3.2.1. Тест на галотолерантность и ксеротолерантность
3.2.2. Морфология колоний при росте на разных средах
3.2.3. Дыхательная активность изолята Д. тсагпаШт в стационарной фазе роста (14-е сутки роста) при культивировании на МА и МА с добавлением 10% ИаС!

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Характеристика засоленых почв в местах сбора образцов.
Образцы отбирали из трех географических точек: побережье
Поморийского озера (Болгария), Мертвого моря (Израиль) и озера Баскунчак (Российская Федерация), мест природного засоления. В каждой точке отбирали по 6 образцов на расстоянии 10 м друг от друга из поверхностного слоя почвы.
Поморийское озеро - это естественная гиперсоленая лагуна, отделенная от моря песчаной отмелью. Оно располагается около города Поморие (42°33'24'' с. ш., 27°38'43" в. д.).
Соленость воды Поморийской лагуны поднимается выше 80 %о. На берегу моря, на месте древних ванн, в которых выпаривали морскую воду, произошло образование естественных гиперсоленых почв с нейтральным уровнем pH. Соленость прибрежных почв Черного моря в районе г. Поморие доходит до 5,5%, при этом концентрация NaCl в почве составляет до 0,6%. Образцы засоленных почв были отобраны на побережье Поморийского озера у самой кромки воды недалеко от города Поморие, рядом с древними соляными ваннами (рис. 3).
Мертвое море, расположенное в Сирийско-Африканской рифтовой долине, является одним из самых соленых озер на Земле (соленость около 340 9бо). Этот водоем отличается от прочих озер уникальным ионным составом воды - концентрация двухвалентных ионов (Mg21 40,7 %о; Са2+17 %о) превышает концентрацию одновалентных ионов (Na+ 39,2 %0; К+ 7 %о). Главными анионами являются СГ (212 %о) и Вт (5 %о). Активность неразбавленной воды Мертвого моря (aw) составляет около 0,669 (Krumgalz & Millero 1982). Соленость почв Мертвого моря доходит до 17%, концентрация NaCl составляет более 1% (Wasser et aol., 2003). Образцы были отобраны на побережье Мертвого моря у самой кромки воды недалеко от города Эйн Бокек (рис. 4).