Видовой состав возбудителей альтернариоза пасленовых культур на территории России

• Автор: Орина, Александра Станиславовна
• Шифр специальности: 03.02.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 139 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Альтернариоз пасленовых культур
1.2 Современное представление о видовом составе грибов рода Акетапана пасленовых культурах
1.2.1 Таксономия рода Акетапа
1.2.2 Молекулярная идентификация видов Акегпапа
1.2.3 Виды Акетапа — патогены пасленовых культур
1.2.4 Внутривидовое разнообразие видов Акетапа,
ассоциированных с пасленовыми культурами
1.3 Патогенные свойства Акетапа $рр.
1.3.1 Методы изучения взаимоотношений в патосистеме Акетапа
ярр. - паслёновые культуры
1.3.2 Патогенность возбудителей альтернариоза
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Изоляция грибов в чистую культуру
2.2 Идентификация и исследование макро- и микроморфологии
изолятов
2.2.1 Исследование морфологических признаков
2.2.2 Оценка влияния условий культивирования на
микроморфологические признаки изолятов мелкоспоровых видов
2.1.3 Коллекция чистых культур
2.3 Молекулярно-генетические методы
2.3.1 Выделение ДНК из мицелия грибов
2.3.2 Выделение ДНК из гербарного материала
2.3.3 Разработка праймеров, специфичных для комплекса видов
‘А. йоШпГ
2.3.4 ПЦР с видоспецифичными праймерами
2.3.5 ПЦР с универсальными праймерами (ПР-РСК)
2.3.6 ПЦР со случайной амплификацией полиморфной ДШС (КАРО-РСЯ)
2.3.7 Визуализация результатов амплификации
2.4 Оценка патогенности изолятов Акетапа
2.4.1 Условия эксперимента
2.4.2 Получение инокулюма и стимуляция спороношения

2.4.3 Усовершенствование лабораторной методики оценки агрессивности крупноспоровых видов Акегпагіа
2.4.4 Оценка агрессивности видов Акегпагіа при совместном заражении
2.5 Статистические методы РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЙ Глава 3. БИОРАЗНООБРАЗИЕ И РАСПРОСТРАНЕНИЕ ГРИБОВ РОДА АЬТЕШАША НА ПАСЛЕНОВЫХ КУЛЬТУРАХ НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ
3.1 Разнообразие мелкоспоровых видов Акегпагіа по микро- и макроморфологическим признакам
3.1.1 Анализ морфологических признаков изолятов мелкоспоровых видов Акегпагіа
3.1.2 Влияние условий культивирования на морфологические признаки изолятов мелкоспоровых видов Акегпагіа
3.2 Разнообразие крупноспоровых видов Акегпагіа по микро- и макроморфологическим признакам
3.3 Распространение видов Акегпагіа на пасленовых культурах на территории России
3.3.1 Распространение видов Акегпагіа на картофеле
3.3.2 Распространение видов Акегпагіа на томате
3.3.3 Распространение видов Акегпагіа на перце
3.3.4 Распространение видов Акегпагіа на баклажане
3.3.5 Распространение видов Акегпагіа на декоративных пасленовых
3.3.6 Анализ видового состава возбудителей альтернариоза пасленовых культур
3.3.7 Создание коллекции чистых культур рода Акегпагіа Глава 4. МОЛЕКУЛЯРНАЯ ИДЕНТИФИКАЦИЯ ВИДОВОГО И ВНУТРИВИДОВОГО РАЗНООБРАЗИЯ ГРИБОВ АЬТЕШАША, РАСПРОСТРАНЕННЫХ НА ПАСЛЕНОВЫХ КУЛЬТУРАХ
4.1 Молекулярная идентификация видов Акегпагіа в пораженных растительных тканях
4.1.1 Разработка праймеров, специфичных к комплексу видов ‘А. зоїапГ
4.1.2 Молекулярная идентификация видов Акегпагіа в пораженных растительных тканях

4.2 Дифференциация изолятов комплекса видов ‘А. solanV по молекулярным маркерам
4.3 Сравнительный анализ результатов морфологического и молекулярного исследования изолятов комплекса видов ‘А. solanV
Глава 5. ПАТОГЕННОСТЬ ВИДОВ ALTERNARIA ПО ОТНОШЕНИЮ К КАРТОФЕЛЮ И ТОМАТУ
5.1 Патогенность крупноспоровых видов Alternaria
5.1.1 Усовершенствование лабораторной методики оценки патогенности крупноспоровых видов Alternaria
5.1.2 Оценка патогенности видов A. solani и A. tomatophila
5.2 Патогенность мелкоспоровых видов Alternaria
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ 1
ПРИЛОЖЕНИЕ 2
ПРИЛОЖЕНИЕ 3

• стандартное освещение: 8 ч. освещения люминисцентными лампами -16 ч. темноты;
• полное затемнение;
• освещение эритемными лампами (две лампы ЛЭ-30, длина волны 400-500 нм, на расстоянии 20 см от поверхности полки).
Для анализа микроморфологических признаков готовили препарат споровой массы. Соскоб брали из средней части колонии. При просмотре препаратов конидий под микроскопом учитывали наличие или отсутствие вторичных боковых и апикальных конидиеносцев и число локусов на них. Для измерений просматривали 70-100 конидий каждого изолята.
2.2.3 Коллекция чистых культур
Создана и поддерживается коллекция изолятов грибов рода АНегпапа, ассоциированными с пасленовыми культурами Моноспоровые изоляты хранятся в 1,5 мл микропробирках типа Эппендорф на среде Чапека (0,7 мл) в двух повторностях при +4°С.
2.3 Молекулярно-генетические методы
2.3.1 Выделение ДНК из мицелия грибов
Для выделения ДНК изоляты выращивали на среде Чапека в течение 7-10 сут. при 23±1°С. Стерильным скальпелем с поверхности чашек Петри собирали 50-150 мг воздушного мицелия, который подсушивали фильтровальной бумагой, помещали в 1,5 мл микропробирку типа Эппендорф и замораживали при -80°С.
Экстракцию ДНК из мицелия грибов проводили методом, представляющим собой комбинацию нескольких стандартных протоколов (АиэиЬе! е! а!., 2002).
В микропробирки с мицелием вносили 150 мкл экстрагирующего 2% СТАВ-буфера (цетилтриметиламмоний бромид [СТАВ] — 2%, ИаС1 - 1.4 М, ЕОТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) - 20 шМ, pH 8.0, трис-(оксиметил)-аминометан [Тт-НС!] - 0.1 М) и оксид алюминия на кончике