Молекулярно-генетическое исследование врожденной дисфункции коры надпочечников, обусловленной недостаточностью 21-гидроксилазы

• Автор: Рахимкулова, Айгуль Айратовна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 136 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1.1. Врожденная дисфункция коры надпочечников. Общие представления

1.2. Биосинтез кортикостероидов

1.3. Классификация форм врожденной дисфункции коры надпочечников

1.3.1. ВДКН при недостаточности StAR-протеина

1.3.2. ВДКН при дефиците 20,22-десмолазы (P450scc)

1.3.3. ВДКН при недостаточности 3-[1-гидроксистероиддегидрогеназы (3ßHSD)

1.3.4. ВДКН при дефиците 17-а-гидроксилазы (Р450с17)

1.3.5. ВДКН при дефиците 11ß-гидроксилазы (P450cl lß) и алъдостеронсинтазы (P450cl 1AS)
1.3.6. ВДКН при недостаточности Р45О-оксидредуктазы (POR)
1.4. ВДКН, обусловленная недостаточностью 21-гидроксилазы (Р450с21)
1.4.1. Клинические формы 21-гидроксилазной недостаточности
1.4.2. Распространенность ВДКН при дефиците 21-гидроксилазы
1.4.3. Белок 21-гидроксилаза: строение, функции. Участие в развитии ВДКН
1.4.4. Молекулярно-генетические основы 21-гидроксилазной недостаточности
1.4.4Л. Структура, локализация генов CYP21A2 и CYP21P
1.4.4.2. Мутации в гене CYP21A
1.4.4.2.1. Точечные мутации гена CYP21A
1.4.4.2.2. Делеции, конверсии и химерные конструкции
1.4.5. Генофенотипическая корреляция
1.4.6. Диагностика недостаточности 21-гидроксилазы
1.4.7. Неонатальный скрининг новорожденных на ВДКН
2.1. Материал для исследования
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение геномной ДНК
2.2.2. Полимеразная цепная реакция
2.2.3. Рестрикционный анализ

2.2.4. ББСР-анализ
2.2.5. Определение нуклеотидной последовательности
2.2.6. Анализ внесенных БТЯ-локусов
2.2.7. Методы статистической обработки
3.1. Анализ частоты встречаемости ВДКН в Республике Башкортостан
3.2. Анализ гена СУР21А2 у больных ВДКН из РБ
3.2.1. Скрининг «классических» мутаций гена 21-гидроксилазы
3.2.2. Поиск изменений нуклеотидной последовательности гена СУР21А

3.2.3 Кластеры мутаций гена СУР21А
3.2.4. Анализ полиморфных вариантов гена СУР21А2 у больных ВДКН и в группе контроля из РБ
3.3. Анализ корреляции генотип-фенотип
3.4. Анализ внегенных вТК-локусов 0682670 и 068273 в семьях больных ВДКН и здоровых семьях
3.4. Практическое применение полученных результатов молекулярногенетического изучения недостаточности 21-гидроксилазы
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АГС - адреногенитальный синдром АКТГ - адренокортикотропный гормон ВДКН - врожденная дисфункция коры надпочечников НФ - неклассическая форма
ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов
ПФ - простая вирильная форма
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РБ - Республика Башкортостан
СТФ - сольтеряющая форма
ЭПР - эндоплазматический ретикулум
CYP2JA2 - ген 21-гидроксилазы
DI ІЕА - дегидроэпиандростерон
DOC - дезоксикортикостерон
PBR - бензодиазепиновый рецептор
RAAS - ренин-ангиотензин-алдостероновая система
StAR - направленный белок-регулятор стероидогенеза
STR - short tandem repeats

1.4.4.2.2. Делеции, конверсии и хгшерные конструкции
В большинстве популяций у больных с классической формой ВДКН около 20% мутантных аллелей несут крупные делеции, затрагивающие гены С4В и CYP21A2 и создающие химерные гены. Как правило, такие нарушения в гомозиготном состоянии приводят к развитию СТФ ВДКН. К примеру, делеция 30 kb З'-конца CYP21A1P, всей последовательности TNXA, RP2, С4В и 5'-конца CYP21A2, ведет к образованию нефункционального химерного гена с 5' и З'-концами CYP21AlPu CYP21A2, соответственно. В 2% случаев встречаются делеции гена при сохранении всей последовательности псевдогена. Дупликации фрагментов длиной 30 kb, включающие гены RP, С4, TNX, встречаются на 12-16% мутантных хромосомах (White et al., 2000).
Возникающие в результате неравного кроссинговера или делеций во время мейоза химерные конструкции генов CYP21A1P/CYP21A2 и TNXA/TNXB обуславливают развитие около 20% ВДКН в большинстве популяций мира (Lee et al., 2013). На сегодняшний день идентифицировано девять форм химерных CYP21A1P/CYP21A2 конструкций, ведущих к различным формам ВДКН в зависимости от структуры. Три из них, СН-1, СН-2, СН-3, впервые были найдены в китайской популяции. СН-1 включает промотерную область и экзоны 1-3 псевдогена с мутациями р.РгоЗОЬеи, I2splice, G110del8, остальная часть химерной конструкции соответствует активному гену CYP21A2. Химерный ген СН-2 соответствует п се вдо I е ну С YP21А1Р в промотерном регионе и экзонах 1-5. СН-3 содержит промотерную область и экзоны 1-8 псевдогена с мутациями р.РгоЗОЬеи, I2splice, G110del8, p.Ile!72Asn, p.Ile235Asn, p.Val236Glu, Met238Lys, F307+lnt, p.Gln318X, мутация p.Val281Leu не представлена в данной химерной конструкции. Химерный ген СН-4 был обнаружен у больных с НФ ВДКН из Европы. Сайт связывания в химерной конструкции СН-4 расположен между экзоном 1 псевдогена и интроном 2 активного гена, таким образом, возникший гибридный ген отличается от функционального гена