Оценка роли генетических и средовых факторов в формировании алкогольных психозов у человека

• Автор: Кущёва, Надежда Сергеевна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Белгород
• Количество страниц: 136 с. : 2 ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. Клиническая характеристика алкогольных психозов
1.2. Современные представления об этиологии и патогенезе алкогольных психозов
1.3. Средовые факторы формирования алкогольной патологии
1.4. Биологические механизмы развития алкогольной патологии
1.5. Наследственные факторы развития алкогольных психозов
1.6. Молекулярно-генетические факторы алкогольных психозов
1.7. Заключение
Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
II 1. Материалы исследования
II 2. Методы исследования
11.2.1. Клинические методы
11.2.2. Клинико-генеалогический метод
И.2.3. Молекулярно-генетические методы
ІІ.2.4. Генетико-статистические методы
И.2.5. Статистические методы
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Глава III. ХАРАКТЕРИСТИКА ИССЛЕДУЕМЫХ ВЫБОРОК
III. 1. Социально-биологические характеристики пациентов
111.2. Клинические характеристики обследованных пациентов
111.3. Клинико-генеалогические характеристики больных алкоголизмом, перенесших алкогольные психозы
Глава IV. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ
ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К АЛКОГОЛЬНЫМ ПСИХОЗАМ
IV. 1. Характеристика частот аллелей и генотипов ферментов метаболизма этанола в исследуемых группах
IV .2. Анализ ассоциаций аллелей и генотипов полиморфизма генов
ферментов метаболизма этанола с развитием алкогольных психозов
IV.3. Анализ ассоциаций генов ферментов метаболизма этанола с развитием алкогольных психозов в зависимости от наследственной отягощенности
IV.4. Изучение взаимосвязей генов ферментов метаболизма этанола с
клиническими проявлениями алкогольных психозов
IV.5. Анализ межгенных взаимодействий при алкогольных психозах
IV.6. Оценка вероятности развития алкогольных психозов
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота МФЗ - мультифакториальные заболевания;
МЭ - метаболизм этанола
МЭОС - микросомальная этанолокисляющая система ОНП - однонуклеотидный полиморфизм ПАВ - психоактивные вещества
ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов; ПЦР - полимеразная цепная реакция; рхв - равновесие Харди-Вайнберга;
ФМЭ - ферменты метаболизма этанола
ЦНС - центральная нервная система
ЧМТ- черепно-мозговые травмы
ADH - алкогольдегидрогеназа
ALDH - альдегиддегидрогеназа
Cl - confidence interval, доверительный интервал;
CYP2E1- цитохром Р4502Е1
LD - linkage disequilibrium, неравновесие по сцеплению; MDR - multifactor dimensionality reduction, многофакторное понижение размерности;
OR - odds ratio, отношение шансов; rg - гаметическая корреляция; rs - коэффициент ранговой корреляции Спирмена у2 -квадрат с поправкой Йейтса

Выделение геномной ДНК проводили из периферической крови стандартным двухэтапным методом фенольно-хлороформной экстракции (Marmur J., 1961). Лейкоциты, осажденные дважды с PBS центрифугированием, лизиро-вали в ТЕ-буфере протеиназой К в присутствии 0,4% додецилсульфата натрия. Клеточную суспензию инкубировали в течение ночи в термостате при температуре 42°С. Геномную ДНК экстрагировали из клеточного лизата в три этапа: сначала фенолом, насыщенным 10 шМ Трис-HCl (рН=8,0) (1:1), после чего фенолом и хлороформом (по одному объёму фенола и хлороформа на два объёма надосадочной жидкости) и последний раз хлороформом (1:1). ДНК преципити-ровали 96% этанолом, высушивали, растворяли в ТЕ-буфере и замораживали (-20°С).
Амплификация фрагментов ДНК проводилась методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). При приготовлении растворов для проведения ПЦР использовали реагенты высокой степени очистки (Ultra pure и Biotechnology Grade). ПЦР проводили в 12 мкл. реакционной смеси, содержащей 0,5 мкл. образца геномной ДНК. Смесь для амплификации включала: 67 гаМ Трис-НС1 рН=8,8, 16,6 гаМ сульфата аммония, 6,7 мкМ ЭДТА, 2,0-7,0 шМ MgC12, 1 mM p-меркаптоэтанола, 1 шМ каждого dNTPs (dATP, dCTP, dTTP и dGTP), 15 нМ каждого из праймеров и 1U Taq-полимеразы (Центр молекулярной генетики, Москва). Для предотвращения испарения амплификационной смеси и образования конденсата на реакционную смесь наслаивали 30 мкл. минерального масла. Амплификацию проводили на многоканальном термоциклере «Терцик» (НПО «ДНК-Технология», Москва).
Обнаружение ОНП проводились путем обработки ПЦР специфическими рестриктазами согласно протоколам, описанным производителями ферментов. После инкубации рестрикционной смеси проводили разделение фрагментов ДНК с помощью электрофореза. В зависимости от размера разделяемых фрагментов ДНК использовали агарозный гель различной концентрации 0,8-3,5%, приготовленный на основе ТВЕ-буфера (0,089 М Трис-HCl, 2 mM ЭДТА, 0,089 М борная кислота), а также 6-8% ПААГ (соотношение акриламид: метиленби-