КЛИНИКО-МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ИЗОЛИРОВАННЫХ ПОЯСНО-КОНЕЧНОСТНЫХ МЫШЕЧНЫХ ДИСТРОФИЙ, ЯВЛЯЮЩИХСЯ ФЕРМЕНТОПАТИЯМИ

• Автор: Рыжкова, Оксана Петровна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 113 с. : 15 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ
Список использованных сокращений
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы
Научная новизна
Практическая значимость
Положения, выносимые на защиту
Апробация работы
Глава I
I Обзор литературы
1.1 Распространенность и* систематика прогрессирующих мышечных дистрофий
1.2 Взаимодействие белков, участвующих в процессе мышечного сокращения
1.2.1 Структура мышечного волокна
1.2.2 Функция белка кальпаина 3 в мышечной клетке
1.2.3 Функция фукутин-связанного белка в мышечной клетке
1.3 Этнопатогенез' ПКМД с АР типом наследования, обусловленных мутациями в генах ферментов
1.3.1 Этиология ПКМД2А типа
1.3.2 Этиология ПКМД 21 типа
1.4 Клиническая картина ферментопатий при ПКМД с АР типом наследования
1.4.1 Характеристика ПКМД
1.4.2 Клиническая характеристика ПКМД2А типа
1.4.3 Клиническая характеристика ПКМД21 типа
Глава И
II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
11.1 Объекты исследования
11.2 Методы
11.2.1 Выделение геномной ДНК
П.2.2 Полимеразная цепная реакция
П.2.3 Мультиплексная пробзависимая лигазная реакция

11.2.4 Исследование двух частых мутаций c.550delA и c.598-612del в гене CAPN3 методом ПДАФ-анализа
11.2.5 Электрофорез в ПААГ
11.2.6 Определение нуклеотидной последовательности
11.2.7 Исследование неравновесия по сцеплению
11.2.8 Расчет возраста мутации
Глава III:
III РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
111.1 Молекулярно-генетический анализ ПКМД2А типа
III. 1.1 Анализ последствий мутации с. 1915+10G>T в гене CAPN
III. 1.2 «Горячие» экзоны гена CAPN
III.1.3 Мутация c.598_612del гена CAPN
III. 1.4 Мутация c.550delA генаСАРЫЗ
III. 1.5 Разработка и практическое применение системы идентификации
двух частых мутаций гена CAPN3, c.550delA и c.598_612del
III. 1.6 Эффект основателя для мутации c.550delA (p.Thrl 84ArgfsX36)
III. 1.7 Особенности клинических проявлений ПКМД 2А типа
111.2 Молекулярно-генетический анализ ПКМД21 типа
111.2.1 Анализ мутации с. 1078G>C (p.Asp360His) в гене FKRP
111.2.2 Анализ мутации с.265С>Т p.Pro89Ser в гене FKRP
111.2.3 Анализ мутации с.826С>А (p.Leu276Iie) гена FKRP
111.2.4 Эффект основателя для мутации с.826С>А (p.Leu276Ile)
111.2.5 Особенности клинических проявлений ПКМД21 типа
Ш.З Статистический анализ сходства клинической картины групп пациентов с различными типами ПКМД
III.3.1 Оценка различий между группами пациентов с ПКМД по значениям КФК.
III.4 Алгоритмы диагностики ферментопатий у больных с клиникой ПКМД с АР типом наследования
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
Список публикаций по теме диссертационной работы
Список литературы

Список использованных сокращений
АА - акриамид
АД - аутосомно-доминантный
АР — аутосомно-рецессивный
БАА - бисакриламид
ВМД — врожденная мышечная дистрофия
ГТФ - гуанидилтрифосфат
ДАБК - дистрофин-ассоциированный белковый комплекс ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
МГНЦ РАМН - Медико - Генетический Научный Центр Российской Академии Медицинских Наук
ПААГ - полиакриамидный гель
ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов
ПКМД - поясно-конечностная мышечная дистрофия
ПМД - прогрессирующая мышечная дистрофия
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота
сМ - сантиморганида
CAPN3 - ген белка кальпаина
FKRP - ген фукутин-связанного белка
MLPA - Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification
NCBI - National Center for Biotechnology Information
OMIM - Online Mendelian Inheritance in Man
TBE - трис-боратный буфер

Рисунок 6.
Ген СЛРЮ

<М чН т-І <М ч-ІСО -Н *-1 (М СО N П тН СО тН СМ СО гН СМ
N8 1 Па 1в1 НЬ III 1Э2 [_ IV
Р9в«ео1у1№ (МИТМШ С2>11ко йотаЛп Св2« ЫпОмд ИопмШ
Расположение гена САРМЗ на хромосоме 15 2. А. Ген кальпаина 3 человека с тремя альтернативными промоторами 'РиЬ ’ (во всех тканях), ‘Рт ’(в скелетных мышцах) и 'Р1’(в хрусталике глаза). Б. Экзоны гена САРИЗ. В. Доменная структура белка кальпаина 3.
На сегодня в гене САРЮ известно более 300 мутаций, вызывающих ПКМД2А, большая часть которых (более 60%) является однонуклеотидными заменами, из которых приблизительно 70%
относятся к миссенс-мутациям. Описаные мутации в гене САРЫЗ распределены по всей его длине, но большая их часть локализуется в ограниченном числе экзонов рис.7. Так около 80% мутаций, выявленных в Бразилии, локализованы в 6-и экзонах САРЫЗ: 1, 2, 4, 5, 11 и 22, приблизительно 87% мутаций, обнаруженных в популяциях Италии, приходится на 7 экзонов: 1, 4, 5, 8, 10, 11 и 21, большинство мутаций, обнаруженных у британских пациентов локализуются в 1, 4, 5, 10.