Изучение ассоциаций полиморфизма генов факторов некроза опухолей и их рецеп-торов с формированием рака молочной железы

• Автор: Луговая, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Белгород
• Количество страниц: 114 с. : 10 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 .Современные представления о факторах риска

развития рака молочной железы

1.2.Генетические факторы в развитии рака молочной железы.

1.3.Факторы некроза опухолей и их рецепторы: молекулярногенетические характеристики и медико-биологические
эффекты

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.Общая характеристика групп исследования

2.2. Методы исследования
2.2.1.Методы клинических исследований
2.2.2.Иммуноморфологические методы
2.2.3.Молекулярно-генетические методы
2.2.4.Методы анализа и статистической обработки результатов
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1.Сравнительный анализ частот полиморфизмов генов ТУТа, лимфо гоксина и рецепторов ТНГа 1 и 2 типов при раке молочной железы и в популяционном контроле
3.2.Анализ ассоциаций полиморфизмов генов ТНГа, лимфо-токсина и рецепторов ТЫГа 1 и 2 типов с возрастными, эндокринно-метаболическими и семейно-наследственными факторами при раке молочной железы
3.3. Анализ ассоциаций полиморфизмов генов ТПГа, лимфо-токсина а и рецепторов Т14Га 1 и 2 типов с клиническими осо-

бенностями рака молочной железы
3.4. Иммунофенотипические особенности рака молочной железы и их связь с клиническими характеристиками опухолей
3.5.Анализ ассоциаций полиморфизмов генов ТОТа, лимфо-токсина а и рецепторов ТЫЬа 1 и 2 типов с иммунофенотипче-скими особенностями рака молочной железы
ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУ ЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ
Список использованных сокращений РМЖ - рак молочной железы TNF - фактор некроза опухолей Lta - лимфотоксин а
TNFR - рецепторы фактора некроза опухолей ER - рецепторы эстрогенов PgR - рецепторы прогестерона
Her2/neu - рецепторы эпидермального фактора роста 11 типа

ВВЕДЕНИЕ
Рак молочной железы (РМЖ) неизменно занимает первое место в структуре онкологической заболеваемости женщин в экономически развитых странах. В 2009 г. в России зарегистрировано 54315 новых случаев рака молочной железы, что составляет 20,1% общей онкозаболеваемомости. По сравнению с 2004 г. прирост составил 10,3%, средний показатель заболеваемости - 44,2 на 100 тысяч женского населения [Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2011].
В настоящее время серьезной проблемой в клинической онкологии при планировании терапии РМЖ является значительная вариабельность чувствительности опухолей к лечебным мероприятиям, в связи с выраженной их морфологической, иммунологической и генетической гетерогенностью. К числу биологически значимых тканевых маркеров рака молочной железы относятся рецепторы стероидных гормонов: рецепторы эстрогенов и прогестерона, специфически связывающие соответствующие стероидные гормоны и опосредующие их биологические эффекты. Гормонозависимые опухоли молочной железы, содержащие оба, или хотя бы один из рецепторов, имеют более благоприятное течение и оказываются чувствительными к гормонотерапии [Моисеенко В.М., и др., 1997; Кушлинский Ы.Е., Герштейн Е.С., 2001; Семиглазов В.Ф. и др., 2001]. Тирозинкиназные рецепторы семейства ЕгЬВ, активизирующие родственные рецепторы, являются ключевым звеном передачи митотических сигналов. Гиперэкспрессия гена с-егЬВ-2 (Ыег2/пеи) в опухоли ассоциируется с увеличением темпов ее роста и метастазировапием, а также неблагоприятно влияет на показатели безрецидивной и общей выживаемости [Hortobagyi G.N.,1999; Piccart М.J.,1999; Семиглазов В.Ф., 2000].
Многочисленные исследования с применением достижений молекулярной биологии выявили связи между экспрессией различных групп генов, особенностями клинического течения РМЖ и его чувствительности к различным видам терапии [Silvestrini R., Benini E., et.al., 1993; Wooster R., et al.,1995; Ciardiello F., 2001; Любченко JI.H. и др., 2004]. По данным литсрату-

холевых клеток. Полученные количественные результаты вносили в общую статистическую базу с результатами клинических и генетических исследований.
Для объективизации полученных иммуноморфологических данных создавали базу электронных изображений с помощью системы сканирования и архивирования изображений «MiraxDesk», а также на микроскопе «Leica DM4000B», оснащенного цифровой видеосистемой регистрации и анализа изображений. Последующий анализ экспрессии иммуногистохимических маркеров осуществляли на электронных аналогах микропрепаратов.
2.2. 3. Молекулярно-генетические методы
У всех пациенток основной группы (250) и у индивидуумов популяционного контроля (248) выполнено типирование четырех молекулярногенетических маркеров: диаллельные локусы генов TNFa (-308G/A TNFa), Lta (+250A/G Lta ), рецептора фактора некроза опухоли 1-го типа (+36A/G TNFR1 ) +36A/G TNFRJ и рецептора фактора некроза опухоли 2-го типа {+1663A/G TNFR2).
Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществлялось в лаборатории "Молекулярной генетики человека" медицинского факультета Белгородского государственного национального исследовательского университета (руководитель -д.м.н., профессор М.И. Чурносов).
Материалом для исследования послужила венозная кровь в объеме 8-9 мл, взятая из локтевой вены пробанда. Забор венозной крови производили в пробирки с консервантом, содержащим 0,5М раствор ЭДТА (рН=8.0).
Выделение геномной ДНК из периферической крови осуществлялось методом фенольно-хлороформной экстракции [Mathew С.С., 1984] в два этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляли 25 мл визирующего буфера, содержащего 320мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5мМ MgCL, ЮмМ трис-НС1 (рН=7,6). Полученную смесь перемешивали и центрифугировали при 4°С, 4000 об./мин. в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную