Молекулярно-цитогенетический анализ ДНК района прикрепления хромосомы 2L к ядерной оболочке трофоцитов яичников малярийного комара Anopheles beklemishevi (Diptera, Culicidae)

• Автор: Пищелко, Анна Олеговна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 113 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Гетерохроматин - эволюционно значимая часть генома эукариот

1.2 Структурно-функциональные особенности

гетерохроматина интерфазных ядер

1.3 Молекулярный состав гетерохроматина

1.4 Гетерохроматин политенных хромосом Diptera

1.4.1 Drosophila

1.4.2 Anopheles
1.5. Таксономия комплекса maculipennis
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Характеристика объекта исследования
2.2 Приготовление цитологических препаратов политенных хромосом
2.3 Микродиссекция с последующим получением ПЦР-
продукта
2.4 Микроклонирование ПЦР-продукта
2.5 In situ гибридизация ДНК-пробы из хромосомы 2L Ап. beklemishevi на геномную ДНК исследуемых видов
2.6 Выделение геномных ДНК An. beklemishevi, An. messeae,
An. atroparvus
2.7 Выделение плазмидной ДНК
2.8 Секвенирование клонов минибиблиотеки Abekl2L
2.9 Анализ последовательностей ДНК
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ 5
3.1 Особенности локализации ДНК района прикрепления
хромосомы 2L An. beklemishevi на хромосомах видов Diptera
3.1.1 Особенности локализации ДНК района прикрепления хромосомы 2L An. beklemishevi на хромосомах видов Anopheles комплекса maculipennis
3.1.2 Особенности локализации ДНК района прикрепления хромосомы 2L An. beklemishevi (Abekl2L) на хромосомах видов D. melanogaster, D. erecta, D. teissieri
3.1.3 Характеристика последовательностей ДНК минибиблиотеки Abekl2L
3.2 Взаимосвязь особенностей молекулярного состава ДНК и
прикрепления к оболочке участков прицентромерного
гетерохроматина политенных хромосом комаров комплекса
Anopheles maculipennis
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Список принятых сокращений и обозначений ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
Atr2R - минибиблиотека из прицентромерного гетерохроматина хромосомы 2R An. atroparvus
Abekl2L - минибиблиотека из прицентромерного гетерохроматина
хромосомы 2L An. beklemishevi
ПГ - прицентромерный гетерохроматин
РП - район прикрепления хромосомы к оболочке ядра
ПЦР - полимеразная цепная реакция
DOP-ПЦР - полимеразная цепная реакция с частично вырожденными праймерами
кДНК — ДНК, синтезированная из зрелой мРНК в реакции, катализируемой обратной транскриптазой.
МГЭ — мобильные генетические элементы M/SAR - Matrix/Scaffold Association Region п.н. - пар нуклеотидов
срДНК - ДНК из белковых сердцевин розеткоподобных структур, скДНК - ДНК синаптонемного комплекса, ялДНК - ДНК ядерной ламины т.п.п. - тысяч пар нуклеотидов

районы всех хромосом объединены в общий хромоцентр. Например, в ядрах слюнных желёз D. melanogaster хромосомы объединены в хромоцентр и гомологичные хромосомы конъюгируют между собой. Хромоцентр располагается на периферии ядра и контактирует с ядерной оболочкой при помощи тяжей гетерохроматина (Hochstrasser, Sedat, 1987а). Хромоцентральная организация ядра соматических тканей является характерной особенностью прицентромерного гетерохроматина у видов рода Anopheles (Стегний, 1979; 1987). Например, в ядрах слюнных желёз личинок An. messeae прицентромерные гетерохроматиновые районы всех хромосом также объединены в хромоцентр и прикреплены к ядерной оболочке (Шарахова, 1996). Исключение составляют ядра трофоцитов яичников самок имаго у видов комплекса Ап. maculipennis, хромосомы которых не связаны в единый хромоцентр и имеют характерную гетерохроматиновую структуру (Стегний, 1979, 1987а). У дрозофил политенные хромосомы и одновременное отсутствие хромоцентра показано в мутантных линиях otu и fs2b вида D. melanogaster (Mal’ceva, Zhimulev, 1993; Жимулёв, 1993).
1.4.1 Drosophila
Хромомерная структура характерна только для эухроматина. В гетерохроматине диски и междиски отсутствуют. Тем не менее, для гетерохроматина описано два типа структуры — а- и ß-гетерохроматин (Heitz, 1934). Э. Хайтц полагал, что а-гетерохроматин политенных хромосом соответствует а-гетерохроматину митотических хромосом. Однако, это не легко определяется, так как при политении некоторые последовательности митотических хромосом могут быть более или менее представлены и, в соответствии с этим, образовывать а- или