Влияние фенологического возраста листьев березы повислой (Betula pendula Roth.) на непарного шелкопряда (Lymantria dispar L.) и течение вирусной инфекции

• Автор: Павлушин, Сергей Викторович
• Шифр специальности: 03.02.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 92 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Роль синхронизации фенологий кормовых растений и их фитофагов в динамике популяционной плотности ранневесенних видов насекомых-филлофагов

1ЛЛ. Динамика морфологических и химических изменений в листьях кормовых растений в процессе сезонного развития

1Л .2. Влияние качества питания на филлофагов
1.2. Непарный шелкопряд - один из важнейших массовых видов
насекомых-дефолиаторов весеннее-летнего комплекса
1.2.1 Подвиды непарного шелкопряда
1.2.2. Вспышки массового размножения непарного шелкопряда
1.3. Бакуловирусные инфекции насекомых
1.3.1. Патогенез при бакуловирусных
инфекциях
1.3.2. Влияние кормового растения на чувствительность насекомых к вирусной инфекции
1.3.3. Латентная форма бакуловирусных
инфекций
1.4. Механизмы резистентности насекомых к вирусным инфекциям

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Объекты и условия проведения
исследований
2.2. Моделирование фенологической асинхронное между березой повислой и непарным
шелкопрядом
2.3. Выращивание насекомых на

2.4. Анализ популяционных показателей непарного шелкопряда
2.5. Определение смертности насекомых и ее этиологии
2.6. Определение уровня вирусоносительства в изучаемой популяции
2.7. Определение иммунологических параметров непарного шелкопряда
2.7.1. Определение фенол-оксидазной активности в лимфе
2.7.2. Определение интенсивности инкапсуляции в гемолимфе
2.7.3. Количественное определение белка
2.7.4. Количественное определение гемоцитов
2.8. Инфицирование насекомых
2.9. Химический анализ листьев
2.10. Объемы выборок и статистическая обработка данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ
ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Динамика фенологических изменений химического состава листьев березы повислой
3.2. Влияние фенологической асинхронное на показатели жизнеспособности непарного шелкопряда

3.3. Влияние фенологической асинхронности на параметры иммунитета непарного шелкопряда
3.4. Влияние фенологической асинхронности на чувствительность непарного шелкопряда к вирусу ядерного
полиэдроза
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

HC1 pH 9; 0,5 M KC1; 1% Тритон X-100; H20), 1,6 mM MgCl2; 0,2 мМ смесь dNTPs; 0,2 мкМ для обоих праймеров; 1 unit Taq ДНК полимеразы, 7 мкл исследуемого образца и Н20 до конечного объема.
Амплификация выделенной ДНК производилась в амплификаторе "БИС" М-111 при условиях 95°С 60 с, 52°С 60 с, и 72°С 60 с (всего 45 циклов). После амплификации ПЦР продукты были проанализированы с помощью электрофореза в 1% агарозном геле в 1х ТАЕ буфере.
2.7. Определение иммунологических параметров непарного
шелкопряда
Для проведения анализа иммунологических критериев использовали индивидуальное исследование насекомых. Все иммунологические критерии состояния организма непарного шелкопряда изучали на гусеницах IV возраста. В этом же возрасте, отдельная часть насекомых заражалась вирусом ядерного полиэдроза для оценки восприимчивости (см. раздел 2.8),
Для отбора гемолимфы мы делали небольшой прокол под предпоследней ложноножкой гусениц тонкой иглой. С каждого насекомого было собрано около 25-30 мкл гемолимфы и помещено в охлажденные пробирки Эпендорфа для последующего анализа общего количества гемоцитов и фенолоксидазной активности.
2.7.1. Определение фенолоксидазной активности в лимфе
Фенолоксидазную активность измеряли спектрофотометрически, используя L-дигидроксифенилаланин (L-ДОФА) в качестве субстрата (Martemyanov et al., 2012). Для этого 10 мкл отчищенной от гемоцитов лимфы инкубировали с 500 мкл раствора L-ДОФА в фосфатном буфере (pH 7,2) (концентрация 2 мг/мл) в течение 1 часа при 28°С. Детекцию