Вирусоносительство и проявление полиэдроза у непарного шелкопряда (Lymantria dispar L.)

• Автор: Поленогова, Ольга Викторовна
• Шифр специальности: 03.02.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 101 с. : ил.

Содержание работы

Список сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Биология, экология и распространенность непарного шелкопряда 10 (Lymantria dі spar L.)
1.2. Общая характеристика вирусов насекомых, симптомы и патогенез вирусной инфекции

1.2.1. Структурная и молекулярная организация бакуловирусов

1.2.2. Патогенез вирусной инфекции

1.2.3. Резистентность насекомых к вирусной инфекции

1.2.4. Эпиозоотология бакуловирусов

1.3. Способы передачи вируса

1.3.1. Горизонтальная передача
1.3.2. Вертикальная передача
1.4. Латентность бакуловирусов
1.5. Персистенция бакуловирусов в популяциях насекомых
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Сбор яйцекладок, хранение и подготовка яиц
2.2. Культивирование насекомых
2.3. Выделение и очистка вируса
2.4. Заражение гусениц вирусом
2.5. Диагностика причин гибели насекомых с помощью светового микроскопа
2.6. Диагностика скрытого вирусоносительства с помощью метода полимеразной цепной реакции
2.7. Статистическая обработка данных
Глава 3. Результаты и обсуждения
3.1. Исследование уровня вирусоносительства в популяциях непарного шелкопряда на различных фазах динамики численности
3.2. Изучение чувствительности к вирусу ядерного полиэдроза гусениц непарного шелкопряда из популяций с различным уровнем вирусоносительства
3.3. Исследование вертикальной передачи вируса ядерного полиэдроза в череде генераций непарного шелкопряда при инфицировании гусениц родительского поколения высокой и низкой дозами вируса
3.3.1. Вертикальная передача вируса ядерного полиэдроза в череде генераций непарного шелкопряда при инфицировании гусениц родительского поколения высокой дозой вируса
3.3.2. Вертикальная передача и активация латентной вирусной инфекции у непарного шелкопряда в череде генераций при заражении гусениц родительского поколения низкой дозой вируса
Заключение
Выводы
Библиографический список

Список сокращений
ВГ .... вирус гранулеза
ВЦП .... вирус цитоплазматического полиэдроза ВЯП .... вирус ядерного полиэдроза
ВЯП НШ .... вирус ядерного полиэдроза непарного шелкопряда
ДНК .... дезоксирибонуклеиновая кислота
ИПС.... искусственная питательная среда
мРНК .... матричная рибонуклеиновая кислота
ПМ.... перитрофическая мембрана
пн ... .пары нуклеотидов
ПЦР .... полимеразная цепная реакция
РНК .... рибонуклеиновая кислота
СВК.... супервириокапсид
СПВК .... суперполивириокапсид
ОРР... зеленый флуоресцентный белок
ЬС .... летальная концентрация
pH .... обратный логарифм концентрации ионов водорода в растворе ЦЗЛ - центр защиты леса
дифференцировать вертикальную передачу вируса от уже возможно существующей скрытой инфекции. В дочернем поколении ЗФГ выявлялся с помощью ПЦР у потомков, родители которых являлись вирусоносителями (Kemp et al., 2008).
Результаты по исследованию вертикальной передачи вируса у непарного шелкопряда неоднозначны. По данным Муррея и Элкинтона (Murray, Elkinkton, 1989) гибель насекомых от полиэдроза среди потомков особей, выживших после заражения вирусом в фазе гусеницы IT-го возраста, составила менее 2%. Авторы полагают, что смертность от полиэдроза среди потомков родительского поколения явилась результатом случайной лабораторной контаминации насекомых вирусом. Однако Шапиро и Робертсон (Shapiro, Robertson, 1987) в схожих экспериментах показали, что гибель насекомых от спонтанного полиэдроза в дочернем поколении варьировала от 4,7% до 11,5%. Эти авторы, в свою очередь, относят смертность насекомых от полиэдроза среди потомков инфицированного поколения на счет вертикальной передачи вируса. В других экспериментах по изучению вертикальной передачи ВЯП у непарного шелкопряда наблюдали зараженность особей в дочернем поколении на уровне 15% (Myers, 2000).
Ямао (Yamao et al., 1999) инфицировали рекомбинантным вирусом гусениц тутового шелкопряда. Клонированный ген Bombyx mori метили ЗФБ и использовали для замены части цепи гена полиэдрина ВЯП Autographa californica. Бабочек, полученых от инфицированных гусениц скрещивали с нормальными самцами. Анализ ДНК потомства показал, что химерный ген интегрировал в геном тутового шелкопряда по механизму гомологичной рекомбинации и стабильно передавался из поколения в поколение и экспрессировался в шелковичной железе (Yamao et al., 1999).
Гусениц Spodoptera exigua заражали во II и III-м возрасте суспензией ВЯП (SeMNPV) и с помощью ОТ-ПЦР и количественной ПЦР обнаружили