Иммунный ответ, состояние антиоксидантной и детоксицирующей систем личинок большой вощинной огневки Galleria mellonella L. (Lepidoptera, Pyralidae) при бактериозах, вызванных Bacillus thuringiensis

• Автор: Гризанова, Екатерина Валерьевна
• Шифр специальности: 03.02.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 133 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1 Л. Энтомопатогенные бактерии Bacillus thuringiensis

1Л Л. Распространение

1Л .2. Токсины и другие метаболиты

1 Л.З. Механизмы действия 8-эндотоксина

1Л .4. Симптомы действия 8-эндотоксина

1.2. Механизмы резистентности насекомых к инфекциям

1.2.1. Внешние системы защиты
1.2.2. Иммунная система насекомых
1.2.3. Антиоксидантная и детоксицирующая системы насекомых
1.3. Механизмы резистентности насекомых к бактериям
Bacillus thuringiensis
1.3.1. Иммунный ответ насекомых в течение бактериальной инфекции
1.3.2. Антиоксидантная и детоксицирующая системы
кишечника насекомых в течение бактериальной инфекции
1.3.3. Вклад неспецифических эстераз в формирование
резистентности насекомых к бактериям
1.4. Заключение
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Насекомые
2.2. Бактерии
2.3. Заражение насекомых бактериями
2.4. Селекция насекомых на устойчивость к бактериям
2.5. Реактивы
2.6. Приготовление образцов внутренних органов
2.7. Определение активности фагоцитоза
2.8. Определение интенсивности инкапсуляции

2.9. Определение активности фенолоксидаз в гемоцитах
2.10. Определение активности фенолоксидаз в плазме гемолимфы
2.11. Подсчет общего количества гемоцитов
2.12. Определение лизоцим-подобной антибактериальной активности гемолимфы
2.13. Определение индекса коагуляции гемолимфы
2.14. Приготовление гомогенатов кишечников
2.15. Определение активности каталазы в кишечнике
2.16. Определение активности супероксиддисмутазы в кишечнике
2.17. Определение концентрации тиолсодержащих соединений кишечника
2.18. Определение активности неспецифических эстераз кишечника
2.19. Определение активности глутатион трансфераз кишечника
2.20. Ингибирование активности неспецифических эстераз кишечника
2.21. Приготовление образцов жирового тела и ткани кишечника для выделения РНК
2.22. Выделение РНК и синтез кДНК
2.23. Условия проведения реакции ПЦР в реальном времени
2.24. Определение концентрации белка
2.25. Статистическая обработка данных
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Иммунный ответ личинок Galleria mellonella при полулетальной и сублетальной бактериальной инфекции, вызванной В. thuringiensis
3.1.1. Выживаемость личинок G. mellonella при заражении сублетальной и полулетальной концентрацией бактерий В. thuringiensis
3.1.2. Реакции клеточного иммунного ответа
3.1.3. Реакции гуморального иммунного ответа
3.2. Иммунная, антиоксидантная и детоксицирующая системы личинок
G. mellonella при селекции на устойчивость к бактериям В. thuringiensis
3.2.1. Устойчивость насекомых пятого и десятого поколения селектированной линии к бактериям В. thuringiensis
3.2.2. Иммунная система селектированных насекомых
3.2.3. Антиоксидантная и детоксицирующая системы кишечника
3.3. Вклад неспецифических эстераз кишечника в формирование резистентности личинок G. mellonella к бактериальной инфекции
В. thuringiensis
3.3.1. Чувствительность личинок G. mellonella к бактериям В. thuringiensis при ингибировании неспецифических эстераз кишечника
3.3.2. Активность неспецифических эстераз кишечника у внутривидовых
форм G. mellonella
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.2.3. Антиоксидантная и детоксицирующая системы насекомых
В организме аэробных организмов постоянно происходит генерация активированных кислородных метаболитов. Повышение уровня синтеза активированных кислородных метаболитов в результате каких-либо воздействий может быть токсично, как для проникающих паразитов, так и для организма насекомых, поскольку эти соединения обладают высокой реакционной и окислительной способностью (Зенков и др, 2001). В процессе формирования защитных механизмов от свободно радикального окисления в организме насекомых, сформировалась антиоксидантная система, инактивирующая радикальные соединения.
К активированным кислородным метаболитам (АКМ) относят, образующиеся в результате взаимодействия с кислородом радикалы и соединения не радикальной природы, такие, как супероксид анион, перекись водорода, гидроксильный радикал, оксида азота, перекисные и алкоксильные радикалы и т.д. (Зенков и др., 2001).
В клетках основными источниками образования супероксидного аниона (02*) являются ферментативные системы НАДФ-Н-оксидазы фагоцитирующих клеток, митохондриальная цитохром С оксидаза, микросомальные монооксигеназы. Продукция многих цитотоксических веществ начинается при взаимодействии веществ не радикальной природы с супероксиданионом. Перекись водорода (Н202) образуется в пероксисомах, как продукт реакции, катализируемой оксидазами, например, в реакциях дисмутации, катализируемых супероксиддисмутазой (СОД). Гидроксильный радикал (ОН*) является наиболее реакционным из АКМ. Считается, что основным его источником служит реакция Фентона с участием металлов переменной валентности, которые реагируют с перекисью водорода, хотя возможны и другие реакции, которые слабоизучены. Образование оксида азота (N0) в организмах животных происходит при ферментативном окислении ИО-синтазой Ь-аргинина во многих клетках и тканях (Иаррі et аі., 1995; Иаррі, Удэв, 1998; Зенков и др