Факторы и условия, регулирующие функциональную активность буккальных эпителиоцитов и их взаимодействие с Candida Albicans

• Автор: Лукова, Ольга Алексеевна
• Шифр специальности: 03.03.01, 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2015
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 131 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Функциональная активность эпителиоцитов слизистых

оболочек

1.2. Адгезивные взаимодействия мукозальных эпителиоцитов с микроорганизмами

1.3. Toll - подобные рецепторы эпителиоцитов слизистых оболочек

1.4. Внутриклеточные сигнальные пути эпителиоцитов

1.5. Факторы, способные влиять на функциональную активность эпителиоцитов

1.5.1. Гормоны

1.5.2. Цитокины
1.5.3. Иммуномодуляторы
1.5.4. Микробные метаболиты
1.6. Эпителиоциты слизистых оболочек в клинико-лабораторных исследованиях
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объем исследований
2.2. Получение эпителиоцитов слизистых оболочек
2.3. Оценка естественной колонизации эпителиоцитов
2.4. Получение клеточной суспензии Candida albicans
2.5. Оценка адгезии в системе «эпителиоциты - C.albicans»
2.6. Приготовление факторов для воздействия на эпителиоциты
2.6.1. Получение продуктов метаболизма микроорганизмов
2.6.2. Женские половые гормоны
2.6.3. Цитокины

2.6.4. Иммуномодулирующие препараты
2.6.5. Антисептические средства
2.7. Определение уровня экспрессии toll-подобных рецепторов на буккальных эпителиоцитах и жизнеспоспособности клеток
2.8. Ингибирование внутриклеточных сигнальных путей
2.8.1. Подавление активации транскрипционного фактора
NF-AB
2.8.2. Ингибирование активности внутриклеточных митоген-активированных киназ ERKl/p
2.9. Получение сыворотки человека
2.10. Определение уровня сывороточных иммуноглобулинов IgE и IgG
2.11. Определение уровня растворимых s ICAM-1 в сыворотке
2.12. Схема применения лизоцим-содержащего антисептического препарата у часто болеющих детей
2.13. Схема лечения больных с онихомикозом и микробной экземой
с использованием иммуномодулирующих препаратов
2.14. Статистическая обработка результатов
Глава 3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Влияние эндогенных и экзогенных факторов на адгезивность эпителиоцитов слизистых оболочек в экспериментальной системе с С. albicans in vitro
3.1.1. Влияние женских половых гормонов на адгезивность эпителиоцитов в системах с С. albicans
3.1.2. Влияние цитокинов на адгезивность эпителиоцитов в системах с С. albicans
3.1.3. Влияние иммуномодуляторов на адгезивность эпителиоцитов в системах с С.albicans
3.1.4. Влияние антисептических препаратов на адгезивные
реакции мукозальных эпителиоцитов в системах с
С. albicans
3.1.5. Влияние микробных метаболитов на адгезивность
эпителиоцитов в системах с С. albicans
3.2. Участие внутренних метаболических путей в регуляции адгезивных реакций буккальных эпителиоциов
3.3. Условия и факторы, регулирующие экспрессию TLR-2 и TLR-
на буккальных эпителиоцитах
3.3.1. Влияние половых гормонов на экспрессию toll-подобных
рецепторов буккальными эпителиоцитами in vitro
3.3.2. Влияние цитокинов на экспрессию toll- подобных
рецепторов буккальными эпителиоцитами in vitro
3.3.3. Влияние иммуномодулирующих препаратов на экспрессию toll- подобных рецепторов буккальными эпителиоцитами здоровых доноров in vitro
3.3.4. Влияние иммуномодулирующих препаратов на экспрессию toll- подобных рецепторов буккальными эпителиоцитами у пациентов с заболеваниями пародонта..
3.3.5. Влияние антисептических препаратов на экспрессию toll- подобных рецепторов буккальными эпителиоцитами
in vitro
3.3.6. Влияние микробных метаболитов на экспрессию toll-подобных рецепторов буккальными эителиоцитами
in vitro
3.4. Естественная колонизация буккальных эпителиоцитов в оценке
эффективности применения иммуномодуляторов и
антисептиков при некоторых хронических патологиях
3.4.1. Естественная колонизация буккального эпителия больных с микробной экземой до и после лечения с

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Объем исследований
В работе было исследовано свыше 1800 препаратов эпителиоцитов (буккальных и вагинальных) человека. Проведено 54 серии экспериментов с искусственной колонизацией кандид на эпителиоцитах. Естественная колонизация буккальных эпителиоцитов исследована у пациентов с онихомикозом (53 взрослых и 23 детей), у 52 больных микробной экземой, у часто болеющих детей (21 человек), а также у 57 здоровых доноров. Проведено свыше 200 анализов сыворотки 78 пациентов методом иммуноферментного анализа. Выполнено 17 серий экспериментов с использованием проточного цитофлюориметра BD FACS Canto II System with Fluidics Cart (6-color, blue/red, USA).
2.2. Получение эпителиоцитов слизистых оболочек
Клетки буккального эпителия получали утром, натощак от здоровых женщин и мужчин 21-38 лет, а также детей и подростков 2-14 лет путем соскоба с внутренней поверхности щеки. Клетки вагинального эпителия получали от женщин 25-36 лет (на базе женской консультации №1, г. Нижний Новгород). Эпителиальные клетки трижды отмывали от слизистого секрета ЗФР (40g, 5 мин), готовили взвесь с концентрацией 106 кл/мл. Концентрацию эпителиоцитов определяли путем измерения оптической плотности суспензии на денситометре DEN-1 (ООО «Biosan», Латвия). В каждой серии экспериментов участвовали эпителиоциты, полученные не менее чем от 5 доноров.
2.3. Оценка естественной колонизации эпителиоцитов
Индекс естественной колонизации оценивали методом подсчёта бактериальных клеток, адгезировавшихся на эпителиоцитах. Для этого из суспензии эпителиоцитов готовили мазки, фиксировали метанолом (10 мин) и окрашивали 0,25% водным раствором азура A («Sigma», USA). Индекс