Новая гистидиновая кислая фитаза Pantoea vagans : выделение и свойства

• Автор: Сулейманова, Алия Дамировна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 111 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Фитазы - ферменты, гидролизующие фитат
1.1 Структура фитиновой кислоты и фитатов
1.2 Физиологическая роль фитиновой кислоты
1.3 Фитазы микроорганизмов
1.4 Роль фитаз in vivo
1.5 Классификация фитаз
1.5.1 Гистидиновые кислые фитазы (HAPhy)
1.5.2 Р-пропеллерные фитазы (BPPhy)
1.5.3 Цистеиновые или протеин-тирозиновые фитазы (PTPhy)
1.5.4 Пурпурные кислые фитазы (PAPhy)
1.6 Фитазы бактерий семейства Enterobacteriaceae
2. Механизм ферментативного гидролиза фитата
2.1 Гидролиз фитата микроорганизмами
2.2 Практическое применение продуктов гидролиза
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Отбор фитат-гидролизующих бактерий
2. Питательные среды и условия культивирования
3. Идентификация штамма микроорганизма с помощью

секвенирования гена, кодирующего 16Б рРНК
4. Секвенирование полной геномной последовательности Рап{оеа эр. 3.
5. Идентификация штамма с помощью МЬ8А-анализа
6. Получение клеточого лизата
7. Определение локализации фермента
8. Определение белка
9. Определение фитазной активности
10. Выделение и очистка фитазы Р. iagans 3.
11. Электрофорез в ПААГ
12. Масс-спектрометрический анализ (МАЬОІ-ТОБ)
13. Энзиматические свойства фитазы
14. Определение субстратной специфичности фермента
15. Анализ изомеров инозитолфосфатов с помощью НРЬС
16. Идентификация продуктов ферментативного гидролиза
17. Биоинформационный анализ
18. Математическая обработка результатов РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Скрининг микроорганизмов, способных гидролизовать фитат, в пробах почв Татарстана
2. Идентификация изолята
3. Локализация фитазы в клетках штамма Р. vagans 3.
4. Динамика роста и накопления фитазной активности Р. vagans

5. Подбор оптимального метода разрушения клеток
6. Очистка фитазы Р. vagans 3.
7. Определение аминокислотной последовательности фитазы
8. рН-оптимум и рН-стабильность фитазы
9. Температурный оптимум и термостабильность фитазы
10. Влияние ионов двухвалентнных металлов на активность фитазы
11. Субстратная специфичность фитазы
12. Идентификация продуктов ферментативного гидролиза фитата ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ТЕРМИНОВ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

3. Заключение
Таким образом, экологическое состояние окружающей среды, постоянная потребность в фосфатах всех живых организмов и необратимый дефицит доступных соединений фосфора определяют актуальность поиска путей использования фитатов. Это обусловливает необходимость выделения новых микроорганизмов - продуцентов фитаз, получение модифицированных штаммов, синтезирующих ферменты с высокой каталитической активностью и улучшенными характеристиками. Природные и модифицированные штаммы-продуценты фитаз являются основой для инновационных биотехнологий в сельском хозяйстве, биоинженерии, фармакологии и медицине. Эти технологии должны обеспечить создание доступных и экологически чистых биоудобрений, кормовых добавок, профилактических и лечебных медицинских препаратов.