Разработка научно-прикладных направлений совершенствования иммунобиологических препаратов для профилактики холеры и бешенства

• Автор: Никифоров, Алексей Константинович
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 276 с. : 30 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
ГЛАВА 1. ОСНОВНЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЙ, 23 ПРИМЕНЯЕМЫЕ В ПРОИЗВОДСТВЕ МЕДИЦИНСКИХ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ (МИПБ)
(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1. Питательные среды для культивирования микроорганизмов
1.2. Варианты глубинного культивирования, применяемые при производстве иммунобиологических препаратов
1.3. Ферментационное оборудование для культивирования микроорганизмов
1.4. Фильтрационные технологии в производстве МИБП
1.5. Современные направления усовершенствования противовирусных препарг тов на примере средств для постэкспозиционной профилактики бешенства
1.6. Иммуноглобулиновые профилактические препараты: классификация и тех
нологии получения
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.1.1. Штаммы микроорганизмов
2.1.2. Питательные среды, используемые в экспериментах
2.1.3. Экспериментальные животные
2.1.4. Реактивы
2.1.5. Приборы и оборудование
2.2. Методы
2.2.1. Микробиологические методы
2.2.2. Биологические методы
2.2.3. Биохимические методы
2.2.4. Химические методы
2.2.5. Физические методы
2.2.6. Физико-химические методы
2.2.7. Методы выделения гамма-глобулина
2.2.8. Методы контроля гетерологичного антирабического иммуноглобулина
2.2.9. Методы математической и статистической обработки материалов
ГЛАВА 3. КОНСТРУИРОВАНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД НА ОСНОВЕ СУХОГО АВТОЛИЗАТА ПЕКАРСКИХ ДРОЖЖЕЙ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ШТАММОВ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА
3.1. Конструирование питательных сред па основе дрожжевого автолизата для 93 культивирования производственных штаммов V. с/ю1егае
3.2. Применение питательных сред на основе дрожжевого автолизата для культивирования производственных штаммов V. с1ю!егае
3.3. Экономическая эффекгивноегь питательной среды - автолизата пекарских
дрожжей
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ШТАММОВ
V СШЬЕИАБ НА ОСНОВЕ ГИДРОЛИЗАТА ФИБРИНА

4.1. Получение ферментативного гидролизата фибрина
4.2. Конструирование питательных сред на основе ферментативного гидролизе
та фибрина для культивирования штаммов V сИокгае
4.3. Сравнительный анализ питательных сред, полученных на основе гидролизата фибрина и традиционных сред в условиях глубинного культивирования
4.4. Исследования морфометрических показателей холерного вибриона, культивируемого на экспериментальных питательных средах
4.5. Экономическая эффективность питательной среды на основе гидролизата
фибрина
ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА БИОРЕАКТОРА ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ПРОЦЕССОВ ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ПРОИЗВОДСТВЕННЫХ ШТАММОВ ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА
5.1. Технические и конструкторские решения при создании экспериментального ферментера на базе реактора РЗРЯ-6/0
5.2. Определение массообменных харакгеристик аппарата для ферментации
5.3. Исследование процессов культивирования штаммов холерного вибриона-продуцентов протективных антигенов вакцины холерной бивалентной химической таблетированной
5.4. Сравнительный анализ препаратов протективных антигенов V. сИокгае и таблетированной холерной вакцины, полученных с помощью экспериментального и производственного биореакторов
5.5. Изучение физико-химических и иммунобиологических свойств холерной вакцины, произведенной по экспериментальной и традиционной технологиям
ГЛАВА 6. ОЦЕНКА РИСКОВ ПРИ РАБОТЕ С ПРОИЗВОДСТВЕННЫМ]
ШТАММАМИ «ФИКСИРОВАННОГО» ВИРУСА БЕШЕНСТВА
ГЛАВА 7. ПРИМЕНЕНИЕ СОВРЕМЕННЫХ ФИЛЬТРАЦИОННЫХ ТЕХНОЛОГИЙ В ПРОИЗВОДСТВЕ АНТИРАБИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА И РАЗРАБОТКА ПРИНЦИПИАЛЬНОЙ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКОЙ СХЕМЫ, ОБЕСПЕЧИВАЮЩЕЙ КАЧЕСТВО ПРЕПАРАТА ПРИ ИЗГОТОВЛЕНИИ КОММЕРЧЕСКИХ СЕРИЙ
7.1. Разработка биотехнологической системы предварительной осветляющей фильтрация антирабического иммуноглобулина
7.2. Разработка технологического модуля для проведения ультрафильтрации антирабического иммуноглобулина
7.3. Конструирование фильтрационной системы для эффективного удаления гемпигмента и пирогенов из полуфабриката антирабического иммуноглобулина
7.4. Разработка системы стерилизующей фильтрации антирабического иммуноглобулина
ГЛАВА 8. РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ
Е(аЬ’)2-ФРАГМЕНТОВ АНТИРАБИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА
8.1. Выбор оптимальных параметров ферментативного гидролиза антирабического иммуноглобулина
8.1.1.Определение оптимальной температуры проведения ферментативного
гидролиза антирабического иммуноглобулина
8.1.2. Определение оптимальной pH реакционной смеси при проведении фер-

ментативиого гидролиза антирабического иммуноглобулина
8.1.3.Определение условий хроматографического фракционирования антираби
ческого иммуноглобулина
8.1.4. Концентрирование Р(аЬ2’)-фрагментов антирабического иммуноглобули на
8.2. Определение физико-химических показателей антирабического иммуноглобулина, полученного на основе Р(аЬ’)2-фрагментов
8.3. Исследование иммунобиологических свойств Р(аЬ’)2-фрагментов антирабического иммуноглобулина
8.3.1. Определение специфической активности, полученных препаратов
8.3.2. Определение токсигенных и анафилактогенных свойств разработанных
иммуноглобулинов
ГЛАВА 9. ИЗУЧЕНИЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ Ш И/ГЛО ДИАГНОСТИКИ УРОВНЯ АНТИРАБИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ НА ОСНОВЕ ДОТ-ИММУНОАНАЛИЗА
9.1. Изучение использования нитроцеллюлозных мембран для конструирования диагностической тест-системы на основе дот-иммуноанализа
9.2. Детекция уровня вируснейтрализующих антител в коммерческом антира-бическом иммуноглобулине и гипериммунпых сыворотках в дот-иммуноанализе с использованием разработанного диагностикума
9.3. Определение специфичности тсст-систем на основе дот-иммуноанализа дл детекции антирабических антител
9.4. Изучение стабильности диагностикума в процессе хранения
9.5. Экономическая эффективность применения тест-системы на основе дот-иммуноанализа в процессе производства гетерологичного антирабического им
муноглобулина
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ство ферментативного пептона 3,0-4,0 г/л и солевые добавки, вместо применяемых сред, содержащих пептона до 10 г/л (Пат. 2152999 РФ).
Разработана чувствительная питательная среда для выделения V. cholerae, обладающая четкими дифференцирующими свойствами и высокой степенью ингибиции микробных ассоциантов на основе гидролизата казеина со средней степенью расщепления и экстракта кормовых дрожжей (в соотношении 1:1). Соотношение в среде белковых компонентов позволило использовать основы в меньшем количестве, обеспечивающем содержание аминного азота 0,55+0,1%. Таким образом, элективность среды достигнута использованием низкого содержания аминного азота, высоким содержанием натрия хлорида, введением соли натрия пиросульфита и щелочной реакцией среды (Аджиева A.A., 2000).
Заслуживает внимания работа по изучению динамики роста холерного продуцента протективных антигенов для выделения белка токсин-корегулируемых пилей адгезии (TCP) в условиях глубинного культивирования на импортных и отечественных питательных средах. Были использованы L-бульон, бульон из казаминовых кислот с дрожжевым автолизатом и производственные серии бульона по Хоттингеру в сочетании с 1% пептоном (РосНИП-ЧИ «Микроб»). В результате культивирования штаммов V cholerae КМ2414, V. cholerae КМ200, установлено, что они продуцируют токсин и TCP на всех средах, при этом стабильность наследования признаков составляла 100%. Было получено сопоставимое количество бакмассы на указанных средах (Заднова С.П. с соавт., 2003).
Таким образом, на основе проведенного литературного поиска и анализа, можно сделать вывод, что целым рядом исследователей ведутся разработки высокоэффективных, стандартных, питательных сред для культивирования холерного вибриона. Одним из направлений исследований является конструирование питательных основ на базе автолизата пекарских дрожжей.