Влияние ингибитора системы секреции III типа на развитие экспериментальной инфекции, вызванной Chlamydia trachomatis

• Автор: Кост, Елена Андреевна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 122 с. : ил.

Оглавление
Введение

Глава 1. Обзор Литературы

1.1 Характеристика семейства Chlamydiaceae

1.2 Патогенные для человека хламидии

1.3 Жизненный цикл Chlamydia trachomatis

1.4 Персистируюндие формы Chlamydia trachomatis

1.5 Системы секреции бактерий

1.6 Система секреции III типа (ССТТ): строение и функции

1.7 Специфические ингибиторы ССТТ

Глава 2. Материалы и Методы

2.1 Материалы
2.2. Методы
2.2.1 Методы оценки токсичности препаратов для эукариотических клеток
2.2.2 Культуральный метод
2.2.3 Иммуноцитохимическая детекция хламидии в монослое клеток
2.2.4 Иммуноцитохимическая детекция белков-эффекторов ССТТ хламидии в монослое клеток
2.2.5 Автоматизированный метод учета изображений для количественной оценки показателей внутриклеточного размножения C.trachomatis
2.2.6 Оценка действия ингибитора на представителей нормальной микрофлоры человека
2.2.7 Электронно-микроскопическое исследование образцов
2.2.8 Выделение тотальной РНК из культуры клеток
2.2.9 Реакция обратной транскрипции
2.2.10 ПЦР-РВ для анализа экспрессии генов Chlamydia trachomatis
2.3 Дизайн исследования
Глава 3. Результаты
3.1 Характеристика нормального жизненного цикла C.trachomatis в процессе взаимодействия с культурой клеток фибробластов МсСоу
3.1.1 Основные этапы жизненного цикла
3.1.2 Особенностиулыпраструктурной организации форм C.trachomatis
на стадии их развития внутри фагосомы
3.1.3 Изучение морфологических особенностей клеточного пласта в условиях инфицирования C.trachomatis
3.2 Характеристика препарата
3.2.1 Отбор и синтез ингибитора ССТТ
3.2.2 Изучение токсичности ингибитора для эукариотических клеток
3.3 Характеристика биологического действия ингибитора системы секреции III типа (ССТТ) в условиях in vitro
3.3.1 Выбор эффективной концентрации ингибитора ССТТ, подавляющей внутриклеточное размножение C.trachomatis
3.3.2 Улыпраструктурпое изучение действия ингибитора ССТТ на внутриклеточный цикл СЛгаскотаВь
3.3.3 Анализ специфической активности соединения в отношении системы секреции III типа
3.3.3.1 Анализ влияния ингибитора СЬ-55 на локализацию белка 14-З-Зр эукариотической клетки
3.3.3.2 Оценка действия соединения на локализацию эффекторного белка 1псА в клетках
3.4 Оценка эффективности действия препарата СЬ-55 на СЛгаскотаНв на разных стадиях ее жизненного цикла
3.4.1 Воздействие препарата СЬ-55 на стадию адгезии и интернализации хламидий.
3.4.2 Воздействие СЬ-55 на внутриклеточные этапы развития СЛгаскотайв
3.5 Нарушение структуры ССТТ под воздействием ингибитора
3.6 Изучение морфологических особенностей клеточного пласта в условиях инфицирования СЛгасЬотайъ и действия СЬ-
3.7 Действие СЬ-55 на персистентную инфекцию
3.7.1 Получение персистентных форм СЛгаскотай* экспериментальной модели
3.7.2 Изучение активности ССТТ у персистирующих форм
3.7.2.1. Анализ локализации белка 1псС при персистентной инфекции
3.7.2.2 Анализ локализации белка 1псА при персистентной инфекции
3.7.3 Действие 55 на персистентную инфекцию
3.7.4 Влияние СЬ-55 на процесс реверсии
3.8 Влияние ингибитора ССТТ на экспрессию генов СЛгаскотайв
3.8.1 Действие СЬ-55 на экспрессию генов при внесении на разных стадиях жизненного цикла
3.8.2 Уровень экспрессии генов в условиях индукции персистенции с помощью пенициллина и добавления соединения
3.9 Оценка действия ингибитора на представителей аутохтонной микрофлоры человека
Глава 4. Обсуждение результатов
4.1. Собственные данные об изменении жизненного цикла СЛгаскотаШ под действием соединения
4.2. Специфичность действия
4.3 Персистентная инфекция
4.4.Изменение экспрессии генов под действием СЬ-
4.5 Изменение экспрессии генов под воздействием СЬ-55 у персистентных форм
Выводы
Список литературы

Список сокращений
ВОЗ - всемирная организация здравоохранения
ССТТ - система секреции третьего типа
ЛПС - липополисахарид
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ЭТ - элементарное тело
РТ - ретикулярное тело
МОМР - major outer membrane protein - главный белок наружной мембраны
Г1ЦР - полимеразная цепная реакция
СС - система секреции
АТФ - аденозинтрифосфат
АГ - аппарат Гольджи
РНК - рибонуклеиновая кислота
ФСБ - фосфатно-солевой буфер
МОИ - множественность инфекции
ФИТЦ — флюоресцеинизотиоцианат
ТРИТЦ - тетраметилродаминизотиоцианат
МУК - методическое указание
ТЭМ - трансмиссионная электронная микроскопия
СЭМ - сканирующая электронная микроскопия
ЦПМ - цитоплазматическая мембрана
ПП - периплазма
ДМФА - диметилформамид
ДМСО - диметилсульфоксид
СС50 - 50% Cytotoxic Concentration - 50% Цитотоксическая концентрация
ч.п.и - часов после инфицирования
ж.ц. - жизненный цикл
Inc - inclusion membrane protein - белки мембраны включения
КС - клеточная стенка
КОЕ - колониеобразуюшая единица
ингибиторов связано с подавлением процессов транслокации эффекторов в результате нарушения функциональной активности ССТТ. На основании этих данных станет возможным разработка новых поколений лекарственных препаратов.