Параметры восприимчивости и иммунного ответа к Salmonella typhimurium у мышей, генетически отличных по чувствительности к туберкулезу

• Автор: Балунец, Денис Викторович
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 104 с. : 4 ил.

Оглавление
1.Введение

1.1 Актуальность проблемы

1.2 Цель исследования

1.3 Задачи исследования

1.4 Научная новизна

1.5 Практическая значимость

2. Обзор литературы

2.1 Введение

2.2 Патогенез сальмонеллезной инфекции

2.3 Влияние макроорганизма на устойчивость/чувствительность к сальмонеллезной инфекции
2.3.1 ГенБЫШ <тАМР1)
2.3.2 Г ен х1ё
2.3.3 Ген ТЫ14
2.3.4 Гены МНС
2.3.5 Гены, кодирующие НАДФ-оксидазу и ЫО-синтазу
2.3.6 Гены цитокинов
2.3.7 Локусы, контролирующие количественные признаки
3. Материалы и методы
3.1 Линейные мыши
3.2 Получение культуры & 1урЫтипит
3.3 Экспериментальная сальмонеллезная инфекция
3.4 Определение количества сальмонелл в органах зараженных мышей
3.5 Получение макрофагов перитонеального экссудата
3.6 Взаимодействие макрофагов с S.typhimurium
3.7 Анализ клеток методом проточной цитофлуорометрии
3.8 Определение продукции цитокинов методом ELISA
3.9 Картирование генетических локусов, участвующих в контроле
сальмонеллезной инфекции
3.10 Статистическая обработка экспериментльных данных
4. Результаты и обсуждение
4.1 Продолжительность жизни мышей при заражении Salmonella typhimurium
4.2 Размножение сальмонелл в органах инфицированных животных
4.3 Показатели иммунного ответа и характеристика воспалительной реакции в брюшной полости у мышей линий I/St и A/Sn
4.3.1 Антибактериальная активность перитониальных макрофагов мышей линий I/St и A/Sn
4.3.2 Показатели иммунного ответа и характеристика воспалительной реакции в брюшной полости у мышей линий I/St и A/Sn
4.4 Сегрегационный генетический анализ признака чувствительности к сальмонеллезной инфекции
4.5 Анализ на сцепление с генетическими локусами, участвующими в контроле туберкулезной инфекции
5. Заключение
6. Выводы
7. Список литературы

Список используемых сокращений
ЛПС - липополисахарид (lipopolysaccharide)
ПЦР - полимеразная цепная реакция ИЛ- интерлейкин
iNOS - индуцируемая NO- синтаза ИФН-у - интерферон гамма F1 - гибриды первого поколения F2 - гибриды второго поколения ФНО-й - фактор некроза опухоли
XLA - Х-сцепленная агаммаглобулинемия (х linked immunodeficiency).
ROI - активные формы кислорода RNI - активные формы азота
РАМР- патоген-ассоциированные молекулярные патерны (pathogen-associated molecular patterns)
PRR- образраспознающие рецепторами (pattem-recognition receptors)
IFNGR - рецептор для ИФН-у
QTLs - локусы, контролирующие количественные признаки (quantative trait loci) NRAMP1 - Natural resistance - associated macrophage protein
HLA - система лейкоцитарных антигенов (human leucocyte antigens) - главный
комплекс гистосовместимости человека
FCS - эмбриональная телячья сыворотка
КОЕ - колоний образующие единицы
M-cells - М-клетки (microfold cell)

TLR4 происходит при их связывании с ЛПС грамотрицательных бактерий в присутствии липополисахарид-связывающего белка, а также ко-рецепторов MD-2 и CD14 (цитируется по обзору Lam-Yuk-Tseung S. et al., 2003). Активированные TLR4 рецепторы участвуют в передаче сигнала через МуБ88-зависимые и MyD88-независимые/ TRIF-зависимые сигнальные пути к ядру клетки, что приводит к выработке провоспалительных цитокинов макрофагами (Takeda К. et al., 2005). Мыши с недостаточностью по TLR4 рецепторам не способны вырабатывать такие провоспалительные цитокины как ИЛ-12 и ФНО-а, в ответ на введение как S. typhimurium, так и сальмонеллезного липополисахприда (Schuetze N. et al., 2005). В отличие от сальмонеллезной инфекции, единичные мутации, затрагивающие только ген TLR4, не оказывают влияния на восприимчивость к микобактериальной инфекции (Reiling N. et al., 2002).
Мыши с дефектом рецептора Т1г4 становятся резистентными к эндотоксическому шоку (Hoshino К. et al., 1999, Poltorak A. et al., 1998, Qureshi ST et al., 1999). Напротив, y мышей с делецией гена Tlr2 ответ на липополисахарид не нарушен (Takeuchi О. et al., 1999). Таким образом, именно рецептор Tir4, а не Т1г2, необходим для распознавания ЛПС. Взаимодействие TLR4 рецептора с ЛПС приводит к индукции провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8 и ИЛ-12 (Homg T. et al. ,2001, Fitzgerald КА et al., 2001), хемокинов, и увеличению экспрессии генов МНС II класса и индукции экспрессии Nos2 (Takeuchi О. et al. ,1999, Medzhitov R. et al., 1997, Schnare M. et al., 2001), вносящих существенный вклад в защиту макроорганизма от инфекционных агентов.