Разработка принципов ускоренной идентификации микобактерий лазерно-флюоресцентным методом

• Автор: Иванова, Мария Александровна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с. : 38 ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современное состояние проблемы диагностики туберкулеза и

микобактериоза

1.1.1. Нетуберкулезные микобактерии

1.2. Современные методы видовой идентификации

микобактерий

1.2.1. Микробиологические методы видовой идентификации микобактерий

1.2.1.1. Культуральные методы исследования
1.2.1.2. Биохимические методы исследования
1.2.1.3. Автоматизированные системы культивирования микобактерий на жидких средах
1.2.2. Хроматографические методы исследования
1.2.3. Молекулярно-генетические методы исследования
1.3. Обоснование возможности применения лазерно-флюоресцентного метода для ускоренной идентификации микобактерий
1.3.1. Порфирины
1.3.1.1. Микробиологический синтез порфиринов
1.3.1.2. Метаболизм микобактерий
1.3.2. Применение лазерно-флюоресцентного метода для экспресс-индикации бактерий
1.3.3. Заключение
ГЛАВА И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.2. Этапы выполнения работы
2.3. Аппаратура и методика лазерной флюоресцентной диагностики

2.3.1. Алгоритм проведения измерения флюоресценции
2.4. Методика и алгоритм применения микробиологических и лазернофлюоресцентных методов исследования, использованных на различных этапах работы
2.5. Статистическая обработка результатов исследования
2.5.1. Метод факторного анализа
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ГЛАВА III. Фундаментальное исследование флюоресценции микобактерий (in vitro)
3.1. Исследование флюоресценции монокультур микобактерий
3.2. Исследование флюоресценции микобактериальных ассоциаций
ГЛАВА IV. Повышение эффективности лазерно-флюоресцентного метода экспресс-идентификации микобактерий
4.1. Влияние на флюоресценцию микобактерий физических и химических факторов
4.1.1. Зависимость флюоресценции микобактерий от их концентрации и времени наблюдения
4.1.2. Влияние на флюоресценцию микобактерий температуры хранения
4.1.3. Влияние на флюоресценцию микобактерий химических веществ
4.2. Повышение интенсивности флюоресценции микобактерий на основе применения детергента (мирамистин)
4.2.1. Применение детергента (мирамистина) для повышения интенсивности флюоресценции микобактерий
4.2.2. Использование детергента (мирамистина) для дифференциации живых и мертвых микобактерий
4.3. Повышение чувствительности лазерно-флюоресецнтного метода идентификации микобактерий на основе оптических измерений среды

4.4. Единый диагностический алгоритм лазерно-флюоресцентного метода экспресс-идентификации микобактерий
4.5. Апробация усовершенствованного лазерно-флюоресцентного метода идентификации микобактерий на неизвестных клинических штаммах
микобактерий
Глава V. Заключение
Выводы
Практические рекомендации
Список литературы

излучения Не-№ лазера в качестве возбуждающего света позволяет преимущественно возбуждать порфирины дыхательных ферментов и продуктов метаболизма микробов, что является основным признаком, по которому определяют присутствие микробов и их концентрацию в биологической жидкости [117].
Лазерная флюоресцентная диагностика (ЛФД) биологических макромолекул обладает определенными преимуществами и большими возможностями для решения проблем скрининга населения в отношении заболеваний микробной природы [1-12]. Эти преимущества ЛФД обусловлены следующими ее характеристиками: экспрессностыо (процедура измерения откалезанимает минимум времени и позволяет проводить диагностику в режиме реального времени), хорошей чувствительностью (позволяет обнаруживать небольшие концентрации флюоресцирующих веществ), доступностью в экономическом плане [1,21,38,48].
Физически понятие флюоресценции можно объединить с понятием фосфоресценции в одно явление люминесценции. Под действием источника люминесценции молекулы переходят в возбужденное состояние, и их последующее возвращение в нормальное или менее возбужденное состояние сопровождается испусканием люминесцентного излучения [1]. Длительность свечения обусловлена длительностью возбужденного состояния. Люминесценция, сразу прекращающаяся после окончания действия возбудителя свечения, называется флюоресценцией [1,117].
Из большого числа видов биологических веществ есть достаточно много таких, которые являются природными, или естественными, флюорофорами. Это означает, что при соответствующих оптических способах возбуждения и регистрации можно наблюдать некоторый флюоресцентный отклик, характеризующий возбуждаемый материал. Иногда содержание эндогенных флюоресцирующих веществ в составе живых систем и организмов настолько велико, что флюоресценцию можно наблюдать визуально. Такую сильную флюоресценцию дают, например, все зеленые