Характеристика фактора аутоагглютинации возбудителя чумы

• Автор: Рыкова, Виолетта Александровна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 141 с. : ил.

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ АА - аутоагглютинация а. о. - аминокислотный остаток

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ДСН - додецилсульфат натрия

сШТР - дезоксинуклеозидтрифосфат

ЗФР - забуференный фосфатом физиологический раствор

ИФА - иммуноферментный анализ

1Ь - интерлейкин

м. кл. — микробные клетки

м. м. - молекулярная масса

МКА - моноклональные антитела

НКС — нормальная кроличья сыворотка
ПААТ — полиакриламидный гель
п. н. - пары нуклеотидов
ПРА - перекрестно реагирующие антигены
ПЦР - полимеразная цепная реакция
РАО - реакция агломерации объемной
РДП - реакция диффузионной преципитации
РНАг - реакция нейтрализации антигена
РНАт - реакция нейтрализации антител
РПГА - реакция пассивной гемагглютинации
РТПГА - реакция торможения пассивной гемагглютинации
с/в - серовариант
ТЫ1 -То11-подобный рецептор
ФНОа - фактор некроза опухолей альфа
ФА - фактор аутоагглютинации
Р1 — фракция

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ПОВЕРХНОСТНЫЕ АНТИГЕНЫ
ГРАМОТРИЦАТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ (обзор литературы)
1.1 .Общая характеристика поверхностных компонентов
грамотрицательных бактерий
1.2. Поверхностные антигены возбудителя чумы
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Использованные в работе материалы
2.1.1. Штаммы
2.1.2. Питательные среды
2.1.3. Химические реактивы
2.1.4. Диагностические препараты
2.1.5. Сыворотки крови
2.2. Используемые в работе методы
2.2.1. Микробиологические методы
2.2.2. Генетические методы
2.2.3. Биохимические методы
2.2.4. Иммунохимические методы
2.2.5. Статистические методы
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 3. ИДЕНТИФИКАЦИЯ, ВЫДЕЛЕНИЕ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ФАКТОРА АУТОААГЛЮТИНАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ
ЧУМЫ
3.1. Идентификация фактора аутоагглютинации возбудителя чумы
3.1.1. Получение и анализ мутантов Т. резШ,
различающихся по АА
3.1.2. Сравнительный анализ препаратов ЛПС, выделенных
из клеток, различающихся по признаку АА
3.1.3. Поиск фактора, обусловливающего АА клеток К реяИх ЕУ76
3.2. Выделение ФА из клеток возбудителя чумы
3.2.1. Получение и характеристика штамма-продуцента ФА
У реяШ ЕУ76 б/п
3.2.2. Разработка метода выделения ФА возбудителя чумы
3.3. Анализ физико-химических свойств ФА
ГЛАВА 4. ИММУНОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ФАКТОРА АУТОАГГЛЮТИНАЦИИ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ
4.1. Получение препаратов для выявления ФА
и анти-ФА антител
4.2. Сравнительная характеристика ФА и СаП
4.3. Оценка специфичности ФА для У. реяИя
4.4. Поиск антител к ФА в сыворотках крови млекопитающих
4.4.1. Анализ нормальных сывороток крови
различных видов животных
4.4.2. Поиск анти-ФА антител в иммунных сыворотках
4.4.3. Антитела к ФА в сыворотках крови людей
4.5. Оценка возможности использования ФА и анти-ФА антител
для повышения специфичности серологических исследований
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

psendotuberculosis. Антигенный диагностикум на основе ЛПС Y. pestis реагировал в РПГА с поливалентными псевдотуберкулезными сыворотками (Вейнблат В.И., Дальвадянц С.М., Меньшов П.И., 1983).
ЛПС возбудителя чумы имеет перекрестную реактивность с тканями печени и селезенки человека (Видяева H.A., Кутырев В.В., Шанина Л.Н., Проценко O.A., 1992; Feodorova V.A., Golova A.B., 2005), что может иметь значение для выживания микроба в макроорганизме.
Компоненты секреции III типа (T3SS). Важнейшим поверхностным комплексом, который экспрессируется У pestis при 37°С в отсутствие ионов кальция, являются компоненты секреции III типа, образующие инжектисому на поверхности бактерий. Это дает возможность микробам, входящим в контакт с макрофагами и нейтрофилами, впрыскивать в них ряд эффекторных белков, инактивирующих фагоциты и включающих их апоптоз. Мутанты, лишенные T3SS, полностью теряют вирулентность при любом способе заражения (Marenne M.-N., Mota I.J., Cornells G.R., 2004). Большинство белков T3SS охарактеризованы, определена структура их генов, локализованных на плазмиде кальций-зависимости pCD, и предложены модели их действия на эукариотические клетки (Cornells G.R., Boland A., Boyd A.P. et al., 1998). Важную роль в работе T3SS играют поверхностные белки YopB и YopD, образующие поры диаметром 16-23 А° в клетке-мишени и обеспечивающие транслокацию эффекторов через мембрану клеток эукариотов. YopD обладает, по крайней мере, частичной протективной активностью (Andrews G.P., Strachan S.T., Benner G.E. et al., 1999).
Ключевую функцию в работе T3SS выполняет V-антиген (LcrV), являющийся мультифункциональным секретируемым белком (37 кДа), участвующим в регуляции биосинтеза компонентов этой системы (Marenne M-N., Mota I.J., Cornells G.R., 2004). Экспрессия LcrV активируется при дефиците кальция при 37°С. Он взаимодействует с белком LcrG, который блокирует функционирование T3SS, и активирует экспрессию YopB и YopD.