Двухкомпонентная регуляторная система Sak188/Sak189 и ее влияние на свойства Streptococcus agalactiae

• Автор: Рождественская, Анастасия Сергеевна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 154 с. : ил.

Список сокращений

sakl88, sakl89 - гены гистидинкиназы и ДНК-связывающего белка

двухкомпонентной регуляторной системы S. agalactiae соответственно - гены, кодирующие факторы патогенности S. agalactiae

bca а-антиген

bac белок Вас ((3-антиген)

scpB С5а пептидаза

lmb ламинин-связывающий белок

cylE гемолизин

hylB гиалуронидаза

cfb CAMP фактор

sea А В фактор адгезии и агрегации

ghiA глутаминсинтетаза
IgA - иммуноглобулин класса А
п.н. - пары нуклеотидов
ПЦР - полимеразная цепная реакция
SDS - додецилсульфат натрия
ОП6оо - оптическая плотность, измеренная при длине волны
600 нм

Оглавление
Введение
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 ОГнцие сведения о Streptococcus agalactiae
1.1.1 S. agalactiae и его роль в патологии человека и животных
1.1.2 Микробиологическая и биохимическая характеристика
S. agalactiae
1.1.3 Факторы патогенности S. agalactiae
1.2 Особенности строения генома S. agalactiae и методы генотипирования
1.2.1 Особенности строения генома S. agalactiae
1.2.2 Методы сравнительного генетического анализа штаммов
S. agalactiae
1.2.3 Гетерогенность структуры и последовательности гена sak!92 -генетический маркер штаммов S. agalactiae
1.3 Строение и механизм действия двухкомпонентных регуляторных систем
1.3.1 Общие сведения о двухкомпонентных системах
1.3.2 Сенсорные гистидинкиназы: особенности строения и функции
1.3.3 Белки-регуляторы ответа: особенности строения и функции
1.4 Двухкомпонентные регуляторные системы S. agalactiae
1.4.1 Двухкомпонентная система CsrRS/CovRS
1.4.2 Другие двухкомпонентные системы S. agalactiae
1.5 Заключение по обзору литературы
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Объекты исследования
2.1.1 Бактериальные штаммы и условия их культивирования
2.1.2 Векторы, использованные в работе

2.2 Микробиологические методы анализа
2.2.1 Реакция коагглютинадии
2.2.2 Определение чувствительности штаммов ,S'. agalactiae к эритромицину диско-диффузионным методом
2.2.3 Подготовка компетентных клеток и трансформация штаммов

2.2.4 Подготовка компетентных клеток и трансформация штаммов
S. agalactiae рекомбинантными плазмидами
2.2.5 Построение кривой роста для штаммов S. agalactiae
2.3 Методы генетического анализа
2.3.1 Выделение хромосомной ДНК
2.3.2 Выделение плазмидной ДНК
2.3.3 Полимеразная цепная реакция
2.3.4 Мультиплексная ПЦР
2.3.5 Электрофоретическое разделение ДНК в агарозном геле
2.3.6 Выделение ДНК из агарозного геля
2.3.7 Гидролиз ДНК рестриктазами
2.3.8 Лигирование
2.3.9 Секвенирование
2.3.10 Выделение тотальной клеточной РНК
2.3.11 Количественная ПЦР с обратной транскриптазой
2.3.12 Метод SSCP
2.4 Методы белкового анализа
2.4.1 Электрофорез белков в денатурирующих условиях по Лэмли
2.4.2 Определение концентрации белков в клеточном лизате
2.4.3 Двумерный электрофорез белков
2.4.4 Western-blot

2.5 Оценка вирулентных свойств штаммов S. agalactiae при внутрибрюшинной модели стрептококковой инфекции

1.3 Строение и механизм действия двухкомпонентных регуляторных систем
1.3.1 Общие сведения о двухкомпонентных системах
Патогенные стрептококки (S. pyogenes, S. agalactiae, S. pneumoniae, S. mutans и др.) способны колонизировать многие органы и ткани человека и животных и успешно адаптироваться к изменяющимся, а порой и неблагоприятным, условиям окружающей среды. Во многом эта адаптация обеспечивается регуляцией транскрипции генов патогенности, а также генов, отвечающих за метаболизм и адаптацию к условиям стресса. Такая регуляция происходит при участии глобальных белков-регуляторов и двухкомпонентных регуляторных системам [6, 98, 99].
Двухкомпонентная регуляторная система состоит из сенсорной гистидинкиназы, чаще всего заякоренной в мембране и воспринимающей сигналы из окружающей среды, и белка-регулятора ответа (рис. 1.4). В ответ на определенные изменения в окружающей среде происходит АТФ-зависимое фосфорилирование консервативного остатка гистидина в молекуле сенсорной гистидинкиназы, катализируемое другой молекулой гистидинкиназы. После фосфорилирования гистидина белок-регулятор ответа осуществляет перенос фосфатной группы на остаток аспарагина в своей молекуле [99-101]. Эти реакции требуют присутствия катионов двухвалентных металлов, чаще всего Mg2+. Ковалентное присоединение фосфата приводит к изменению конформации белка-регулятора ответа и биохимических свойств его эффекторного домена (домена ответа).
Кроме осуществления функции донора фосфатной группы сенсорная гистидинкиназа может проявлять также фосфатазную активность по отношению к родственному белку-регулятору ответа [99, 100, 102]. Это позволяет быстро останавливать действие регулятора ответа при возникшей необходимости, например, при изменении или прекращении сигнала.