Биологические основы разработки новых технологий для диагностики и мониторинга дифтерии

• Автор: Краева, Людмила Александровна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 188 с. : 47 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список использованных сокращений

Введение

Г лава 1. Обзор литературы

1.1. Характеристика дифтерийной инфекции в постэпидемическом периоде

1.2. Противодифтерийный иммунитету взрослых

1.2.1. Методы и средства определения антител

1.2.2. Роль высокоавидных антител в иммунном процессе

1.2.3.Современные проблемы обеспечения невосприимчивости к дифтерии

1.3. Основные патогенные свойства C.diphtheriae, их изменчивость и методы определения

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Штаммы. Методы культивирования
2.2. Основные патогенные свойства и ангибиотикорезистентность коринебактерий
2.2.1. Адгезивная активность
2.2.2. Токсигенность C.diphtheriae
2.2.3. Чувствительности к антибиотикам
2.3. Иммунологические методы
2.3.1. PH (реакция нейтрализации) в культуре клеток Vero

2.3.2. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)
2.3.3. Иммуноферментный анализ (ИФА)
2.4. Экспресс-способ выявления дифтерийного токсина на основе микротехнологий
2.5. Экспресс-способ выявления токсинообразоавания у штаммов С.сИрЫкепае
2.6. Эпидемиологические методы
2.7. Методы математической обработки данных
2.8. Метод картографического анализа и компьютерной обработки данных
Глава III. Характеристика антитоксического противодифтерийного
иммунитета у населения Санкт-Петербурга, Ленинградской и Вологодской областей в постэпидемическом периоде
3.1. Выбор и обоснование адекватного метода контроля поствакцинального иммунитета
3.2. Характеристика иммунитета к дифтерии у населения из групп «риска»
Глава IV. Значение высокоавидных антител в невосприимчивости к
дифтерии
4.1. Разработка теста для определения авидности антитоксических антител и обоснование его достоверности
4.2. Показатели авидности антитоксических антител в различных группах обследования
4.3. Оценка защищенности от дифтерии с позиций количественнокачественной характеристики антитоксических противодифтерийных антител
4.4. Динамика показателей авидности антител у взрослого населения

4.5. Определение авидности антител в ИФА для дифференциальной диагностики дифтерии и бактерионосительства
Глава V. Характеристика СогупеЬас1егшт сИрк(кег1ае в постэпидемическом периоде
5.1. Адгезивность
5.2. Оценка токсигенности штаммов фенотипическими и молекулярно-генетическим методами
5.3. Определение чувствительности штаммов С.сИрЫкепае к антибиотикам
Глава VI. Влияние факторов электромагнитной природы на основные
биологические свойства С.сИрНЖепае
6.1. Влияние НИЛИ на биологические свойства С.сИрШкепае
6.1.1. Изменение адгезивности
6.1.2. Изменение токсинопродукции
6.1.3. Влияние НИЛИ на чувствительность штаммов С.сИрЫкепае к антибиотикам
6.2. Влияние вихревых магнитных полей различной поляризации и направления вращения на биологические свойства С.сИрЫНепае
6.2.1. Изменение адгезивных свойств
6.2.2. Изменение токсинопродукции
6.2.3. Изменение чувствительности штаммов С.сИрЫЬепае
к антибиотикам
6.3. Влияние последовательного воздействия НИЛИ и ВМП на штаммы С.сИрЫкепае
Глава VII. Разработка новых способов выявления токсигенных штаммов
С.сИрШкепае
7.1. Экспресс-способ выявления дифтерийного токсина на основе
микротехнологий

Ведущим фактором патогенности C.diphtheriae является токсигенность, - способность продукции дифтерийного токсина, который относится к сильнодействующим бактериальным токсинам и уступает только ботулиническому и столбнячному [3, 69, 72, 80, 115, 217, 232, 261, 277, 370].
Дифтерийный токсин по физико - химическим характеристикам представляет собой типичный белок, состоящий из одной полипептидной цепи с относительной молекулярной массой 58358 дальтон, в ее составе два дисульфидных мостика, группы небелковой природы отсутствуют [302]. Любой коммерческий препарат дифтерийного токсина неоднороден, так как часть молекул расщеплена бактериальными протеазами на два фрагмента: А-фрагмент, с относительной молекулярной массой 21164 дальтона и В-фрагмент, относительная молекулярная масса которого равна 37194 дальтона. Аминокислотные последовательности обоих фрагментов определены. В- фрагмент выполняет функцию своеобразного носителя А-фрагмента. Он специфически взаимодействует с рецепторами, находящимися на поверхности эукариотических клеток и способствует проникновению А-фрагмента в цитоплазму чувствительных клеток. Адсорбция дифтерийного токсина на поверхности чувствительной клетки является первым этапом его взаимодействия с ней [243, 252, 256, 279].
Установлено, что степень чувствительности клеток к дифтерийному токсину in vitro определяется количеством специфических рецепторов на поверхности чувствительных клеток. При высокой плотности специфических рецепторов клетки повреждаются малыми дозами дифтерийного токсина, при низкой плотности цитопатический эффект проявляется лишь при больших дозах. Поэтому разные типы клеток могут обладать различной рецепторнозависимой резистентностью к дифтерийному токсину. При взаимодействии В- фрагмента с рецепторными участками клетки формируются трансмембранные каналы, по которым и проникает внутрь клетки А- фрагмент. Последний нарушает нормальный синтез белков и в конечном итоге приводит клетку к гибели. Дифтерийный токсин проявляет