Выделение и идентификация нетуберкулезных микобактерий у пациентов фтизиатрических учреждений

• Автор: Макарова, Марина Витальевна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 237 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ: НЕТУБЕРКУЛЕЗНЫЕ МИКОБАКТЕРИИ

1Л. Классификация, обнаружение в окружающей среде, заражение человека и животных, эпидемиология
1.2. Патогенность нетуберкулезных микобактерий; пути заражения, роль макроорганизма, виды патологии, вызываемой НТМ

1.3. Выделение, идентификация микобактерий, диагностика микобактериозов

1.4. Лечение, лекарственная чувствительность

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

2.1. Выделение и идентификация микобактерий микробиологическими методами

2.1.1. Выделение микобактерий

2.1.2. Первичная идентификация микобактерий культуральными методами

2.1.3. Биохимические методы идентификации, микобактерий
2.2. Высокоэффективная жидкостная хромотография (ВЭЖХ) для видовой идентификации микобактерий
2.3. Молекулярно-генетические методы идентификации: микобактерий
2.3.1. Определение видовой принадлежности микобактерий методом гибридизации на. олигонуклеотидном. микрочипе «IMS»
2.3.2. Определение вида нетуберкулезных микобактерий с помощью оценки полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ)
2.4. Определение лекарственной чувствительности нетуберкулезных микобактерий
2.5. Статистическая обработка результатов
ГЛАВА 3. ВЫДЕЛЕНИЕ НЕТУБЕРКУЛЕЗНЫХ МИКОБАКТЕРИЙ И ИХ ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
3.1. Выделение НТМ на разных питательных средах
3.2. Идентификация видов НТМ, выделенных в Централизо-

ванной микробиологической лаборатории МНПЦБТ..
3.3. Микробиологические характеристики отдельных видов нетуберкулезных микобактерий
ГЛАВА 4. ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКОБАКТЕРИЙ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
ГЛАВА 5. ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКОБАКТЕРИЙ МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ
5.1. Разработка и испытание биологического микрочипа (биочипа) для идентификации НТМ
5.2. Видовая идентификация микобактерий с помощью определения полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) гена квр
5.3. Сравнительные данные использования «БИОЧИП 1МБ» и других методов идентификации НТМ
ГЛАВА 6. ЧАСТОТА ОБНАРУЖЕНИЯ РАЗНЫХ ВИДОВ НЕТУБЕРКУЛЕЗНЫХ МИКОБАКТЕРИЙ В ГОРОДЕ МОСКВЕ И ИХ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫМ ПРЕПАРАТАМ
6.1. «Спектр НТМ» в городе Москве
6.2. Изучение чувствительности нетуберкулезных микобактерий к антибактериальным препаратам
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Нетуберкулезные микобактерии - это микроорганизмы, про которые в начале второй половины XX века хорошо знали микробиологи, а в некоторых странах и клиницисты (вызываемую ими патологию называют микобактериозами). Но затем эта проблема была в значительной степени забыта и вновь приобрела актуальность с распространением ВИЧ-инфекции, поскольку у ВИЧ-инфицированных (особенно на стадии СПИД) часто развиваются микобактериозы, которые в большом числе случаев приводят к летальному исходу [Katoch V., 2004; Khatter S., 2008].
В настоящее время род Mycobacterium включает более 100 видов, й их число продолжает увеличиваться [Euzeby J., 2003; Katoch V., 2004]. Из них наиболее распространены- М. tuberculosis и М. leprae, вызывающие у людей хорошо известные заболевания. Несколько видов микобактерий входят в так называемый М. tuberculosis complex: М. tuberculosis; М. bovis, М. africanum, М. microti, М. canetti, М. caprae, М. pinnipedii. Остальные широко распространены в окружающей среде как сапрофиты, однако в некоторых случаях они могут быть этиологическими факторами тяжелой (вплоть до смертельной) патологии, чаще у людей, имеющих нарушения иммунитета различной природы [Модель Л.М., 1958; Зыков М.П., 1984; Лазовская А.Л., 1991; Оттен Т.Ф., 1994, 1999; Новожилова И.А., 2004; Wolinsky E., 1979, 1992; Tellis С., Putnam J., 1980; Grange J., Yaters M., 1986; Wallace R. et al., 1990, 1997; Olivier K., 1998; Dawson D., 2000; Euzeby J., 2003; Heifets L., 2004; Jarzembowski J., Young M., 2008].
He входящие в M. tuberculosis complex микобактерии долгие годы называли микобактериями окружающей среды (enviromental mycobacteria), возбудителями микобактериозов, атипичными микобак-

Заболевания легких преобладают среди всей патологии, вызываемой НТМ (сегодня «конкуренцию» им составляют диссеминированные поражения у ВИЧ-инфицированных лиц). У детей (даже иммуноком-прометированных) поражения легких, вызванные НТМ, обнаруживают редко [Вишневский Б.И. и др., 1991; Wallace R. et al., 1990, 1997; Koh W. et al., 2002; Katoch V., 2004; Ding L. et al., 2006].
Факторами риска развития легочных микобактериозов, кроме ВИЧ, являются кистозный фиброз, а также предшествующие и сопутствующие заболевания легких, работа в горнодобывающей промышленности, влажный климат. В основном они развиваются у людей среднего и старшего возраста и курильщиков. Характерные предшествующие заболевания (туберкулез, хронические обструктивные заболевания легких -ХОБЛ и другие) имеют место приблизительно у 20% больных микобактериозами [Wallace R. et al., 1983, 1997; Marras Т., Daley С., 2002; Griffith D., 2010].
Были, однако, описаны и случаи заболеваний легких, вызванных НТМ, у пациентов, «не имеющих (?)» предрасполагающих факторов [Iseman М., 1989; Prince D. et. al., 1989; Reuss A et. al., 2009], хотя, возможно, их просто недостаточно активно искали.
Наиболее распространенными возбудителями заболеваний легких среди медленнорастущих НТМ являются MAC и М. kansctsii. М. abscessns, М. fortuitum, М. malmoense, М. simiae, М. szulgai, М. xenopi, М. habana, М. vaccae (и ряд других) тоже могут вызывать такие заболевания (реже) [Wolinsky Е., 1979; Banks S. et al., 1985; Guthertz L. et al., 1989; Chakrabarti A. et al., 1990; Wallace R. et al., 1990; Claydon E. et al., 1991; Shafer R., Sierra М., 1992; Wayne L., Sramek H., 1992; Igari H. et al., 1994; Katoch V. Kumar М., 2001; Holland S., 2001; Nolt D. et al., 2003; Heifets L., 2004; Martin-Casabona N. et al., 2004; Esther C. et al., 2005]. Из быстрорастущих НТМ наибольшее число заболеваний легких вызывают М. abscessus, М. fortuitum и М. chelonae [Wallace R. et al., 1983, 1997;