Инсерционная инактивация оперона вирулентности бактерий Bordetella pertussis в диагностике типичных и атипичных форм коклюша

• Автор: Медкова, Алиса Юрьевна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 99 с. : 6 ил.

Оглавление

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Биологические свойства бактерий Bordetella pertussis

1.1. Морфология и культуральные свойства бактерий Bordetella pertussis

1.2. Факторы патогенности бактерия Bordetella pertussis

2. Молекулярные основы вариабельности бактерий В.pertussis и изменения фазового состава популяции возбудителя коклюша

3. Современное течение коклюша на фоне массовой вакцинопрофилактики

3.1. Типичные и атипичные формы коклюша

3.1.1. Типичные формы коклюша

3.1.2. Атипичные формы коклюша
3.2. Специфическая профилактика коклюша
4. Лабораторное подтверждение диагноза и причины гиподиагностики коклюша
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Разработка тест-системы ПЦР-РВ для выявления ДНК возбудителя коклюша и анализа фазового состава популяции бактерий Bordetella pertussis
1.1. Количественное определение ДНК В.pertussis и геномов бактерий B.pertussis, содержащих интеграции IS481 и IS 1002 в cctagg сайте оперона bvgAS
1.2. Конструирование плазмид pIS481 и pIS 1002 для определения в ПЦР-РВ количества ГЭ ДНК бактерий Bpertussis и их инсерционных авирулентных мутантов
1.3. Оптимизация условий амплификации
1.4. Проверка чувствительности и специфичности разработанной тест-системы ПЦР-РВ

2. Выявление возбудителя коклюша у больных типичными и атипичными формами заболевания бактериологическим методом и ПЦР-РВ
2.1. Сбор клинических образцов от больных коклюшем, другими респираторными инфекциями и от «практически здоровых» детей и взрослых
2.2. Идентификация возбудителя коклюша в клинических образцах бактериологическим методом
2.3. Идентификация и количественное определение ДНК Bordetella pertussis в клинических образцах с помощью разработанной тест-системы ПЦР-РВ
3. Анализ фазового состава популяции бактерий В.pertussis у больных типичными и атипичными формами коклюша и практически здоровых бактерионосителей
4. Изучение сроков персистенции и фазового состава популяции бактерий B.pertussis при экспериментальном заражении мышей
4.1. Определение сроков персистенции бактерий Bordetella pertussis при экспериментальном заражении мышей с помощью бактериологического метода
4.2. Определение сроков персистенции бактерий Bordetella pertussis при экспериментальном заражении мышей с помощью разработанной тест-системы ПЦР-РВ
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
Список использованной литературы

Список сокращений
АДФ - аденозиндифосфат
АКДС - адсорбированная коклюшно-дифтерийно-столбнячная вакцина
АаКДС - аналог АКДС с бесклеточным коклюшным компонентом
арг - аргинин
асп - аспарагин
АЦТ - аденилатциклазный токсин
БКВ - бесклеточная коклюшная вакцина
ВК - внутренний контроль
ВОЗ - Всемирная организация здравоохранения
гли - глицин
ГМФ - гуанозинмонофосфат
ГТФ - гуанозинтрифосфат
ГЭ - геном-эквивалент
Дл каш - симптом «длительный кашель»
днк - дезоксирибонуклеиновая кислота
ДНТ - дермонекротический токсин
дУТФ - дезоксиуридинтрифосфат
ИФА - иммуноферментный анализ
кДа - килодальтон
ККВ - корпускулярная коклюшная вакцина
КОЕ - колониеобразующая единица
КТ - коклюшный токсин
КУА - казеиново-угольный агар
ЛПС - липопорисахаридный эндотоксин
МГЭ — мобильные генетические элементы
МКБ-10 - Международная классификация болезней десятого пересмотра
МОЕ - международные оптические единицы
мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота

протяжении более пятидесяти лет свидетельствует о том, что при высоком охвате прививками восприимчивого населения (не менее 92%) вакцина обеспечивает защиту более 85% детей. Однако после вакцинации АКДС могут возникнуть осложнения различной степени тяжести. К побочным действиям, приписываемым коклюшному компоненту комбинированной АКДС-вакцины, относят повышение температуры тела, плаксивость, раздражительность после прививки, фебрильные судороги и афебрильные судороги, воспалительная реакция в месте инъекции [129, 148]. Одним из факторов, обуславливающих реактогенность цельноклеточного коклюшного компонента, считали ЛПС [148].
В 90-х годах прошлого столетия во многих, даже развитых странах, таких как США, Япония, Англия, Исландия, Норвегия, Швеция, ФРГ и других, из-за риска поствакцинальных осложнений родители отказывались вакцинировать детей. Произошла частичная и даже полная (например, в Японии) отмена противококлюшной вакцинации [35]. Это привело к массовому подъему заболеваемости коклюшем во всем мире.
Такая ситуация привела к необходимости замены ККВ в составе АКДС и созданию новых, безвредных препаратов. Знания об антигенной структуре коклюшного микроба, механизмах формирования иммунитета и методах очистки компонентов вакцины, полученные к концу 80-х гг. прошлого века, позволили определить протективные детерминанты коклюшного микроба и основной антиген, стимулирующий иммунитет при заболевании коклюшем - экстрацеллюлярный КТ. Была разработана более безопасная бесклеточная коклюшная вакцина (БКВ), лишенная ЛПС. Первую БКВ создали в Японии
Н. Sato и соавт. в 1981 г. на основе анатоксина КТ. БКВ различаются между собой по составу, количеству антигенов, методам очистки, способам инактивации токсина, применяемыми адъювантами и т. д.
Положительные результаты клинических испытаний на людях позволили принять бесклеточный коклюшный компонент для АаКДС.