Изучение сферических частиц, образующихся при термической перестройке вируса табачной мозаики, и области их применения

• Автор: Трифонова, Екатерина Алексеевна
• Шифр специальности: 03.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 170 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Создание химерных вирусных частиц на основе вирусов растений

1.1. Химерные вирусные частицы на основе спиральных вирусов растений

1.2. Химерные вирусные частицы на основе икосаэдрических вирусов растений

2. Создание вирусоподобных частиц на основе вирусов растений

2.1. Вирусоподобные частицы на основе спиральных вирусов растений

2.2. Вирусоподобные частицы на основе икосаэдрических вирусов растений

3. Применение химерных вирусных и вирусоподобных частиц, полученных на

основе вирусов растений
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Термическая перестройка вируса табачной мозаики и образование сферических частиц
2. Изучение биохимического состава сферических частиц, образующихся при термической перестройке ВТМ
3. Образование сферических частиц при термической перестройке различных форм белка оболочки ВТМ
4. Сравнительный анализ свойств и структуры белка оболочки в составе
нативного ВТМ и белка в составе сферических частиц
4.1. Белок, выделенный из СЧ, теряет способность к реполимеризации и образованию вирусоподобных частиц

4.2. Изучение возможности биодеградации белка в составе СЧ под воздействием протеолитических ферментов
4.3. Изучение антигенных и иммуногенных свойств сферических частиц
4.4. Определение плотности сферических частиц
4.5. Изучение структурных изменений, произошедших в белке, входящего в состав СЧ, по сравнению с белком оболочки в составе нативных вирионов ВТМ
5. Изучение стабильности сферических частиц
6. Изучение адсорбционных свойств СЧ
7. Характеристика структуры и свойств комплексов СЧ-целевой белок
8. Создание антигенно активных комплексов, полученных на основе СЧ, содержащих антигены вируса гриппа и вируса краснухи
9. Создание антигенно активных комплексов, состоящих из СЧ и двух различных антигенов, одновременно адсорбированных на поверхности
сферических частиц
Ю.Изучение иммуногенных свойств композиций СЧ-антиген,
стабилизированных и нестабилизированных формальдегидом
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Названия вирусов:
ВЖМК - вирус желтой мозаики кабачка (ZYMV - Zucchini yellow mosaic virus)
ВИК - вирус иммунодефицита кошачьих (FIV - Feline immunodeficiency virus)
ВИЧ - вирус иммунодефицита человека первого типа (HIV - Human immunodeficiency virus)
ВККТ - вирус карликовой кустистости томатов (TBSV - Tomato bushy stunt virus)
ВМБ - вирус мозаики бамбука (BaMV - Bamboo mosaic virus)
BMKK - вирус мозаики коровьего горошка (CPMV - Cowpea mosaic virus) BMJT - вирус мозаики люцерны (ALMV - Alfalfa mosaic virus)
ВМПап - вирус мозаики папайи (PapMV - Papaya mosaic virus)
ВМСг - вирус мозаики сорго (JGMV - Johnson grass mosaic virus)
BOM - вирус огуречной мозаики (CMV - Cucumber mosaic virus)
BOC - вирус оспы сливы (PPV - Plum pox virus)
ВПЖТ - вирус просветления жилок турнепса (TVCV - Turnip vein clearing virus)
BTM - вирус табачной мозаики (TMV - Tobacco mosaic virus)
ВХККГ - вирус хлоротической крапчатости коровьего горошка (CCMV -Cowpea chlorotic mottle virus)
XBK - Х-вирус картофеля (PVX - Potato virus X)
YBK - Y-вирус картофеля (YVX - Potato virus Y)
CPV - canine parvovirus (парвовирус собак)
PhMV - Physalis mottle tymovirus (вирус крапчатости физалиса)

случаях БО фитовируса способен одевать чужеродную РНК клетки-хозяина (Tremblay et al., 2006).
Самосборка (реполимеризация) низкомолекулярного БО в ВПЧ у спиральных фитовирусов может осуществляться также in vitro. Процесс реполимеризации БО протекает ступенчато с образованием серии промежуточных белковых агрегатов возрастающих размеров и заканчивается сборкой спиральных ВПЧ, неограниченных по длине в связи с отсутствием нуклеиновой кислоты, размеры которой ограничивают сборку вирионов со спиральной структурой (Атабеков, 2008).
Использование белка оболочки представителей рода Potexvirus для создания вирусоподобных частиц
Вирус мозаики папайи (ВМПап) является представителем рода Potexvirus. БО ВМПап успешно используют для презентации чужеродных пептидов на поверхности ВПЧ. Вирионы ВМПап имеют нитевидную форму и состоят из 1410 идентичных копий БО, организованных в спиральную структуру, внутри которой находится геномная РНК. Г еном ВМПап представлен (+) РНК и состоит из 6656 нт. РНК образует спираль, на один виток которой приходится 8.75 субъединиц БО. Каждая субъединица БО ассоциирована с пятью нуклеотидами РНК (Tollin et al., 1979). Длина вирионов равна 500 нм, а диаметр 15 нм. БО ВМПап состоит из 215 ак. (Verde et al, 1989).
Было показано, что БО ВМПап может собираться в ВПЧ, схожие по структуре с нативными вирионами ВМПап, при экспрессии в клетках E. coli (Tremblay et al., 2006). При этом ВПЧ ВМПап содержат РНК бактериального происхождения. Для очистки вирусоподобных частиц на С-конеце БО была размещена последовательность из шести гистидинов (His)6- Было показано, что гистидиновый пептид располагается на поверхности ВПЧ и,